Сибирский государственный медицинский университет,  г. Томск
Кафеда медицинской генетики
    

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2009 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Актуальность: Сегодня под атопией понимают наследственную тенденцию к гиперпродукции иммуноглобулинов класса E (IgE), которая лежит в основе целого ряда аллергических заболеваний, таких как атопический ринит, поллиноз, атопические формы бронхиальной астмы (БА) и дерматита [1,2]. Существует предположение о различных генетических механизмах регуляции продукции специфического и общего IgE. [4]. Согласно результатам мировой литературы 12 хромосома содержит большинство локусов, отвечающих за регуляцию продукции общего IgE [3]. Поэтому в качестве маркерного гена для настоящего исследования был выбран полиморфный вариант гена IFNG,  находящийся на 12 хромосоме. IFNG может быть потенциальным маркером для исследования, поскольку он находится в антагонистических отношениях с IL4, который регулирует продукцию IgE. Имеются сведения о связи  полиморфизма гена IFNG, обусловленного вариабельностью динуклеотидных повторов, с уровнем общего IgE у детей [4].
Цель: Определить роль полиморфного варианта гена IFNG  в регуляции продукции общего IgE у больных атопическими заболеваниями.
Материал и методы: Включение пациентов проведено методом сплошного одномоментного исследования в процессе диспансерного осмотра приписного населения общих врачебных практик медицинского объединения «Центр семейной медицины» в период 2008-2009. Были сформированы группы больных БА (88 женщин, 48 мужчины) и контрольная группа (105 женщин, 18 мужчин). Возраст исследуемой группы 18-60 лет.
ДНК выделяли из мононуклеаров венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции. Амплификацию фрагментов ДНК проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использовалась ПЦР-смесь: 2,5 ммоль специфических праймеров, 2 ммоль каждого dNTP, 1,2 мл 10х реакционного буфера, 1,5 ммоль MgCl2, 0,5 Ед Taq ДНК-полимеразы (SibEnzime, Россия), 100-200 нг геномной ДНК. Для определения генотипов проводили гидролиз амплифицированных фрагментов гена IFNG рестриктазой Нpa I. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ SPSS for Windows.
Для сравнения частот генотипов между группами использовали точный тест Фишера. Нормальность распределения IgE оценивали по критерию Шапиро-Уилка. Для оценки связи исследуемого полиморфного варианта гена с уровнем IgE использовали критерий Крускола-Уолиса.
                                                                                                                                       

                                                                                                                                         Таблица 1

Распределение генотипов и аллелей варианта гена IFNG в исследуемых группах

Ген	Полиморфизм	Группа сравнения	Генотип абс (%)			р1	Аллель абс (%)		р2
IFNG	rs2069705	здоровые	С/С	T/C	T/T	0,106	C	T	0,294
			27 (24,32)	49 (44,14)	35 (31,53)		103 (46,4)	119 (53,6)
		больные	10 (12,65)	44 (55,69)	25  (31,64)		94 (59,49)	64 (40,50)

Примечание: p¹ – достигнутый уровень значимости сравнения частоты генотипов между группой больных и здоровых индивидов; р² – достигнутый уровень значимости сравнения частоты аллелей гена между группой и больных индивидов.

Результаты: наблюдаемое распределение генотипов по изученному варианту гена IFNG соответствовало ожидаемым при равновесии Харди-Вайнберга и представлено в табл 1. Согласно полученным данным, распределение генотипов и аллелей не различались между больными БА и здоровыми индивидами (р=0,106 и р=0,294) для генотипов и аллелей соответственно). 
Генотип T/С (55,69%) преобладает как у больных БА так и у здоровых индивидов. Тогда как у больных чаще встречается аллель С (59,49%), по сравнению со здоровыми индивидами, у которых преобладает аллель Т (53,6%), однако полученные различия статистически не значимы (р=0,294).
В дальнейшем был проведен анализ связи варианта гена IFNG с уровнем общего IgE. Средние значения уровня IgE у носителей генотипа СС составили – 252,78, СТ – 251,33, ТТ – 215,62. При анализе ассоциации полиморфного варианта гена IFNG с уровнем общего IgE значимых различий выявлено не было (р=0,506).
Выводы: Таким образом, ассоциации гена IFNG (rs2069705) с фенотипом БА в исследуемой группе не обнаружено, также как данный полиморфный маркер не ассоциирован с уровнем общего IgE. В дальнейшем планируется оценка значимости данного варианта для развития БА и поиск связи генетического маркера с уровнем общего и специфического IgE у детей, так как предполагается, что развитие БА в детском возрасте имеет свои особенности.

Список литературы:
1.    Генетика атопии: современное состояние / М. Б. Фрейдин, Е. Ю. Брагина, Л. М. Огородова, В. П. Пузырев // Вестник ВоГИС. – 2006. – Том 10, № 3. – С 55–57.
2.    Роль полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов в развитии атопической бронхиальной астмы / В. А. Казначеев, Ю. В. Гервазиев // Астма. – 2004. – Т. 5, №  1. – С. 73–84.
3.    Gusareva, E. S. Relationship between total and specific IgE inpatients with asthma from Siberia / E. S. Gusareva // J Allergy. Clin. Immunol . – 2008. – № 3. – P. 781–782.
4.    Polymorphism in intron 1 of the interferon-gamma gene influences both serum immunoglobulin E levels and the risk for chronic hepatitis B virus infection in Polynesians /  W. Abbott,  E. Gane et al. // Immunogenetic. – 2007. – № 59. – P. 187–195.