Кафедра фундаментальных основ клинической медицины

Актуальность. Т-регуляторные лимфоциты (Treg) играют важную роль в поддержании иммунного гомеостаза, аутотолерантности, контроле над чрезмерной реакцией иммунных клеток на антигены, удалении аутореактивных лимфоцитов. Для них характерна конститутивная экспрессия CD25, а также транскрипционного фактора Foxp3 (forkhead box P3) [Cools N.,2007]. Особую актуальность на сегодняшний день приобретают методы коррекции иммуноопосредованных заболеваний, основанные на целенаправленном регулировании процесса дифференцировки Тh-лимфоцитов, осуществляющих поляризацию иммунного ответа. В качестве регуляторов Т-клеточного гомеостаза в настоящее время рассматриваются эндогенные гликансвязывающие низкомолекулярные белки семейства лектинов - галектины, способные влиять на процессы трансдукции сигналов, межклеточную кооперацию и реализацию программированной гибели [Рапопорт Е.М.,2008]. На сегодняшний день имеются сведения, что галектины способны модулировать направление иммунного ответа, и рассматриваются в качестве возможных мишеней для создания новых подходов терапии патологических процессов, связанных с гиперактивацией или, напротив, недостаточной функцией иммунитета.

Цель. Оценить влияние рекомбинантного галектина-1 на процесс дифференцировки Т-регуляторных лимфоцитов in vitro.

Материал и методы. Выделение лимфоцитов из крови здоровых доноров выполняли в стерильных условиях методом градиентного центрифугирования с использованием фиколла плотностью 1,077. Для осуществления направленной дифференцировки лимфоцитов в Тreg выделенные клетки в концентрации 2*106/мл пересаживали в культуральные планшеты с добавлением рекомбинантных цитокинов (''RnD Systems'', США): интерлейкин 2 (IL-2) в дозе 10 нг/мл и трансформирующий ростовой фактор β1 (TGFβ1) в дозе 20 нг/мл. Для активации клеток использовали моноклональные антитела ('BD PharmingenT', США): анти CD3 в дозе 1 мкг/мл и анти CD28 в дозе 2 мкг/мл. Для оценки влияния галектина-1 на процесс дифференцировки Т-лимфоцитов в регуляторные Т-клетки в культуральную среду на 4 сутки добавляли различные дозы (1, 5, 7,5 нг/мл) рекомбинантного галектина-1 (''RnD Systems'', США). Инкубировали клеточные культуры в СО2 инкубаторе в течение 7 суток, осуществляя замену питательной среды и ростовых факторов каждые 3 дня. После этого оценивали содержание Treg-лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии по связыванию антител к транскрипционному фактору FoxP3 человека, меченных фикоэритрином (PE); анти-CD25, меченных аллофикоцианином (APC); и анти-CD4, меченных флуоресцеином изотиоцианатом (FITC) (BD Pharmingen, США).

Результаты. В результате проведенного исследования было установлено, что после культивирования интактных лимфоцитов с цитокинами и антителами в определенном диапазоне концентраций количество Т-регуляторных клеток с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+ было достоверно выше по сравнению с исходным уровнем в крови здоровых доноров и составило 41,5+2,3%. Добавление к клеткам рекомбинантного галектина-1 в дозе 5 нг/мл сопровождалось наибольшим увеличением количества регуляторных Т-лимфоцитов, а именно уровень CD4+CD25+Foxp3+-клеток составил 56,2+4,4%, что в 1,75 раз больше, чем в культуре лимфоцитов, активированных только анти-CD3/CD28 антителами и в 1,35 раз превышало количество Treg в культуре клеток в присутствии рекомбинантных цитокинов, необходимых для осуществления дифференцировки наивных лимфоцитов в направлении регуляторных клеток. Таким образом, исходя из проведенного эксперимента следует, что галектин-1 является важным индуктором регуляторных клеток, и в дозе 5 нг/мл способствует значительному увеличению лимфоцитов с супрессорной активностью, что может быть положено в основу перспективного подхода терапии аутоиммунных заболеваний.

Выводы. Рекомбинантный галектин-1 способствует дифференцировке in vitro активированных Т-лимфоцитов в Т-регуляторные клетки с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+. 

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках Федеральных целевых программ «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы» (ГК № 16.512.11.2087), 'Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы' (ГК № 16.740.11.0636) и Совета по грантам Президента РФ для поддержки молодых российских ученых и ведущих научных школ (МД-1233.2012.7; НШ-614.2012.7).