Научные руководители: д-р мед. наук, проф. М.Г. Пустоветова, д-р мед. наук, проф. Е.Н. Самсонова
Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск

Эта работа была опубликована в cборнике материалов I Всероссийской научной студенческой конференции с международным участием «МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ: ДОСТИЖЕНИЯ И ПЕРСПЕКТИВЫ», под редакцией проф., д-ра мед. наук С.И. Карася (г. Томск, 10-11 ноября 2011 года). 

Введение. Хорошо известно, что своевременная профилактика и ранняя диагностика различных заболеваний являются самыми актуальными проблемами современной медицины. Недавно была предложена новая концепция развития ХСН, в основе которой лежит парадигма о системном воспалении как об одном из важных независимых факторов высокого кардиоваскулярного риска [2, 3]. Учитывая современные достижения в изучении патогенеза ХСН, можно предположить влияние полиморфизмов генов, кодирующих провоспалительные цитокины, в частности цитокинов ФНО-а и ИЛ-1, на развитие ХСН.

Цель. Изучить влияние полиморфных вариантов гена ФНО-а, ИЛ-1(3, индуцибельной NO-синтазы (iNOS) (CCTTT)n на риск развития и тяжесть течения ХСН у больных с ИБС.

Материал и методы. Обследовано 226 больных со стенокардией напряжения ФК (55,9±5,8 лет) с ХСН I-IV по NYHA. В 1-ю группу вошли 47 (20,8%) больных с I ФК ХСН, во 2-ю - 96 (42,5%) пациентов со II ФК ХСН, в 3-ю - 83 (36,7%) больных с III-IV ФК ХСН. Группу контроля составили 136 пациентов (63 мужчины и 73 женщин) в возрасте от 45 до 65 лет (в среднем возрасте 53,6±4,8 лет) без клинических проявлений ИБС и ХСН. У всех пациентов забирался генетический материал (букальный эпителий) с последующим типированием аллелей гена ФНО-а (G-308A), ИЛ-1(3 (С+3953Т) и гена индуцибельной NО-синтазы (iNOS) (CCTTT)n. Для выделения ДНК использовали метод фенол-хлороформной экстракции [1]. Генотипирование проводилось методом ПЦР; использовали праймеры, синтезированные в Институте химической биологии и фундаментальной медицины (ИХБФМ СО РАН). Статистическая обработка результатов проводилась с помощью стандартного статистического пакета программ SPSS 13,0. Сравнение частот встречаемости генотипов полиморфных локусов в различных популяциях проводили методом х2. Сравнение средних значений анализируемых показателей проводили с помощью t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна-Уитни.

Результаты и обсуждение. Оказалось, что, в целом, у больных частота аллеля G и генотипа G/G была достоверно выше (соответственно на 11,7% и 13,6%), а частота аллеля A и генотипа А/А была достоверно ниже (соответственно на 11,7% и 9,7%) по сравнению с группой контроля. Следовательно, аллель G (p<0,05) и генотип G/G (p<0,05) являются факторами риска развития ХСН, а аллель A (p<0,05) и генотип A/A (p<0,05) проявили себя как протективный генетический фактор. Распределение частот встречаемости генотипов гена ИЛ-13 в группах больных с ХСН соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга, а в контрольной группе наблюдалось значимое отклонение от ожидаемого распределения генотипов (р=0,034 и р=0,018 соответственно), что, вероятнее всего, было обусловлено тем, что группа контроля не являлась случайной выборкой. Установлено, что в целом у больных частота аллеля С и генотипа С/С была достоверно выше (соответственно на 13,6% и 22,5%), а частота аллеля Т и генотипов С/Т и Т/Т была достоверно ниже (соответственно на 13,6%, 17,9% и 4,6%), чем в группе контроля. Следовательно, аллель С (p<0,05) и генотип С/С (p<0,05) являются факторами генетического риска развития ХСН, а аллель Т (p<0,05) и генотипы С/Т (p<0,05) и Т/Т (p<0,05) проявили себя как протективные факторы. По данным распределения частот генотипов гена iNOS (CCTTT)n, у больных ХСН установлены достоверные (р<0,05) различия с группой здоровых: частота повторов (CCTTT)13 и (CCTTT)14 преобладала в группе больных по сравнению с контролем (23,9% и 13,6% для (CCTTT)13, 9,1% и 2,1% для (CCTTT)14 соответственно), а количество повторов (CCTTT)10 чаще регистрировалось в группе контроля по сравнению с группой больных (6,3% против 3,1%, р<0,05). Следовательно, увеличение количества повторов полиморфного локуса (CCTTT)n гена iNOS до 13-14 ассоциируется с проявлениями ХСН, в то время как количество повторов (CCTTT)10 проявляет себя как протективный фактор. Установлены достоверные различия по частоте встречаемости генетических маркеров генов ФНО-а ИЛ-1(3 в зависимости от тяжести ФК ХСН. Частота генотипа G/G во 2-й (86,5%, р<0,05) и 3-й группе (89,2%, р<0,05) была достоверно выше, чем в 1-й группе (53,2%). Частота же генотипа G/A существенно преобладала в 1-й группе (42,6%, р<0,01) по сравнению со 2-й и 3-й группами (12,5% и 10,8%, соответственно). Различия по частоте аллеля G (I ФК - 74,5%, II ФК - 92,7% и III-IV ФК - 94,6%), а также
аллеля А (I ФК- 25,5%, II ФК - 9,3% и III-IV ФК - 5,4%) оказались достоверными. астота генотипа С/С в 3-й группе достоверно преобладала над таковыми во 2-й и в 1-й группах (84,3%, 57,3% и 29,8%, р< 0,05 и p<0,01, соответственно), а во 2-й группе она значимо превышала ее по сравнению с 1 -й группой (р<0,05). Вместе с тем, генотипы, содержащие аллель Т во 2-й группе встречались чаще, чем в 3-й (39,6% и 13,3%, р<0,01), но реже, чем в 1 -й группе (39,6% против 63,8%, р<0,05). Различия по частоте аллеля С (I ФК - 61,7%, II ФК-77,1% и III-IV ФК - 91,0%) и аллеля Т (I ФК - 38,3%, II ФК - 22,9% и III-IV ФК - 9,0%) также оказались достоверными. оличество повторов (CCTTT)14 гена iNOS достоверно чаще встречалась в группе с III -IV ФК ХСН по сравнению с I ФК (14,5% и 4,3% соответственно, р<0,05) и по сравнению с II ФК (14,5% и 6,8% соответственно, р<0,05), в то же время количество повторов (CCTTT)10 и (CCTTT)11 было выше (р<0,05) в группе пациентов с 1 ФК по сравнению с группой больных с III -IV ФК (5,3% и 0,6% - (CCTTT)10, 38,3% и 16,3% -(CCTTT)11 соответственно).

Выводы. В нашем исследовании установлено, что аллель G полиморфного локуса G-308A ФНО-а, аллель С полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-1(3 и увеличение количества повторов полиморфного локуса (CCTTT)n гена iNOS до 14 является фактором индивидуального повышенного риска развития и тяжести течения ХСН. Напротив, аллель А полиморфного локуса G-308A ФНО-а, аллель Т полиморфного локуса С+3953Т гена ИЛ-1(3 и уменьшение количества повторов (CCTTT)10 гена iNOS ассоциируется с низким риском развития ХСН.

Список литературы:
1.    Аниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. - М.: «Мир»,1984. - 480 с.
2.    Ольбинская Л.И., Игнатенко С.Б. Роль цитокиновой агрессии в патогенезе синдрома сердечной кахексии у больных хронической сердечной недостаточностью. // Сердечная недостаточность. - 2001. - № 2. - С. 132-134.
3.    Тепляков А.Т., Дибиров М.М., Болотская Л.А. и др. Модулирующее влияние карведилола на активацию цитокинов и регресс сердечной недостаточности у больных с постинфарктной дисфункцией сердца. // Кардиология. - 2004. - № 9.- С. 50-57.