Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра медицинской генетики

В последние годы особое внимание уделяется роли инфекционных агентов, способных изменять характер иммунного ответа и вызывать пожизненную персистенцию. Одним из них является герпетическая инфекция (ГИ), вызванная вирусом простого герпеса  I и II типа (ВПГ). В зависимости от состояния иммунной системы возможны три варианта клинического течения инфекции: латентное течение (герпесвирусное носительство), эпизодическое течение (характеризующиеся клинической манифестацией до трех раз в год) и рецидивирующие течение (при котором клинические проявления  инфекции возникают более 5 – 6 раз в год) [2].
При остром адекватном течении герпетической инфекции отмечена поляризация иммунного ответа в сторону Th1 пути, который ассоциирован с продукцией IFNg, IL12 и другими цитокинами. При хроническом течении – в сторону Th2 пути, который связан с выработкой IL4, IL10 и др. [1].  Регуляция экспрессии генов, кодирующих эти молекулы, может определяться наличием однонуклетидных полиморфизмов как самих цитокинов, так и протеинов, участвующих в их сигнальных путях [3, 4].
Цель: исследовать анализ связи однонуклеотидных заменов генов IFN-γ, IL12Rb1 и ТВХ21 с клиническим течением ГИ. В связи с этим была сформирована панель однонуклеотидных полиморфизмов генов: IFN-γ (rs 2069705, С/Т 3' UTR), IL12Rb1 (rs 11575934, G/A exon), ТВХ21 (rs 11652969, A/G intron).
Материал и методы: включение пациентов проведено методом сплошного одномоментного исследования в процессе диспансерного осмотра приписного населения общих врачебных практик медицинского объединения «Центр Семейной Медицины». Сформированы три группы пациентов женского пола в возрасте от 18 до 59 лет. Первую группу составили пациенты с латентным течением ГИ (30 женщин), вторую группу – пациенты с рецидивирующим течением ГИ (28 женщин) и третью группу составили пациенты с эпизодическим течением ГИ (39 женщин).
ДНК выделяли из мононуклеаров венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции. Амплификацию фрагментов ДНК проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Использовалась ПЦР-смесь: 2,5 пмоль специфических праймеров, 2 ммоль каждого dNTP, 1,2 мл 10х реакционного буфера, 1,5 ммоль MgClz, 0,5 Ед Taq ДНК-полимеразы (SibEnzime, Россия), 100-200 нг геномной ДНК. Для определения полиморфных вариантов проводили гидролиз амплифицированных фрагментов генов IFN-γ, IL12Rb1, ТВХ21 рестриктазами: Нра I, Pvu II, BssTH соответственно. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафиолетовом свете.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ SPSS for Windows. Для анализа ассоциации полиморфизмов исследуемых генов с герпесвирусной инфекцией сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах с рецидивирующем, эпизодическим и латентным течением, используя критерий χ2. При получении ожидаемой частоты меньше 5, использовали точный тест Фишера.

Вывод: учитывая роль полиморфизма генов, исследуемых цитокинов при вирусных инфекциях, необходимы дальнейшая дифференциация внутри исследуемых групп, направленная на изучение дополнительных полиморфизмов с клиническим течением герпетической инфекции.

1.    Связь полиморфизма генов цитокинов с особенностями клинического течения герпетической инфекции / Н. А. Черевко, М. Б. Фрейдин, Е. Ю. Брагина, В. В. Климов // Цитокины и воспаление. – 2009. – Том 8. – № 4. – С. 32-36. 
2.    Львов Н. Д. Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций / Н. Д. Львов, А. В. Мельниченко, А. А. Никитина // Вопросы вирусологии. – 2000. – № 4. – С. 7-13
3.    Viral activation of macrophages through TLR-depended and –independed pathways / L. Malmgaard, J. Melchjorsen, A. G. Bowie, S. C. Mogensen, S. R. Paludan // J. Immunol. – 2004. -  № 173. – P. 6890-6898.
The roles of TLRs, RNRs and NLRs in pathogen recognition / T. Kawai, S. Akira // International Immunol. – 2009. – № 4. – P. 317-337.