Сибирский государственный медицинский университет,  г. Томск
Кафедра медицинской генетики

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 68-й научной итоговой студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 20-22 апреля, 2009 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

 

Основу аллергических заболеваний, в частности атопической бронхиальной астмы, со-ставляет активация аллерген-специфичексих  лимфоцитов - Т-хелперов второго типа (Th2-клеток). Секретируемые Th2-клетками цитокины такие как IL4, который на начальных эта-пах гуморального иммунного ответа на аллергены, связываясь с рецептором на поверхности В-клеток, переключает их на производство IgЕ. Кроме того, IL4 активирует экспрессию вы-сокоафинного рецептора к IgЕ(FcεRI) на мастоцитах, а также индуцирует эндотелиальные клетки на производство молекул адгезии, что приводит к селективной аккумуляции эозино-филов в очаге воспаления. IL4 выступает также как фактор роста Т-лимфоцитов и тучных клеток и является ключевым сигналом дифференцировки CD4 +T клеток в хелперы типа 2 [1]. IL4 функционирует через свой рецептор (IL4Р) на клетках мишенях, который при акти-вации внутриклеточных посредников индуцирует экспрессию генов, чувствительных к сиг-налу IL4 [1]. Важными в развитии Th2 опосредованного пути являются транскрипционные факторы STAT6 и GATA3. Дефицит STAT6 у животных при моделировании бронхиальной астмы проявляется в резком снижении степени аллергической реакции вплоть до полного отсутствия [2, 3].
Таким образом, полиморфизм генов IL4, STAT6, IL4RA, GATA3 играет существенную роль в развитии Th2 ассоциированных заболеваний.
Цель исследования - анализ связи однонуклотидных замен генов IL4, STAT6, IL4RA, GATA3 с БА и ее клиническими проявлениями. Была сформирована панель однонуклео-тидных полиморфизмов генов: GATA3(rs 570613,A/G intron 4), IL4(rs 2070874, C/T 5' UTR), IL4RA(rs1805010, A/G exon 5 ), STAT6(rs167769,C/T, introne 1)
Отбор пациентов проводился путем диспансерного осмотра лиц приписного населения общих врачебных практик медицинского объединения «Центр семейной медицины»  в пе-риод 2006-2008 гг. Были сформированы группы больных БА (62 женщины,  24 мужчины) и контрольная группа (99 женщин, 18 мужчин).
ДНК выделяли из мононуклеаров венозной крови методом фенол-хлороформной экстрак-ции. Генотипирование однонуклеотидных замен генов GATA3 (rs 570613,A/G intron 4), STAT6(rs167769,C/T, introne 1) осуществлялось с помощью ПЦР в реальном времени с ис-пользованием коммерческого набора (Новосибирск, ООО Биосан)
Для генотипирования генов IL4RA(rs1805010, A/G exon 5 ), IL4(rs 2070874, C/T 5' UTR)   использовалась ПЦР-смесь: 2,5 ммоль специфических праймеров, 2 ммоль каждого dNTP, 1,2 мл 10х реакционного буфера, 1,5 ммоль MgCl2, 0,5 Ед Taq ДНК-полимеразы (SibEnzime, Россия), 100-200 нг геномной ДНК. Для определения полиморфных вариантов проводили гидролиз амплифицированных фрагментов генов IL4, IL4RA рестриктазами: BstMAI, MspI соответственно. Фрагменты рестрикции гена IL4RA разделяли в 4% агарозном геле с по-следующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией в проходящем ультрафио-летовом свете. Продукты рестрикции гена IL4 разделяли в 12% полиакриламидном геле.
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием про-грамм SPSS for Windows. Для проверки нормальности распределения показателей исполь-зовали критерий Шапиро-Уилка. Для сравнения частот генотипов между группами исполь-зовали точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществ-ляли с помощью критерия Крускола-Уолиса и дисперсионного анализа. Проведен анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов с бронхиальной астмой, наличием специфиче-ской и поливалентной сенсибилизации по данным кожных аллергопроб, уровнем общего IgE, а также с параметрами легочной  функции (PEV%, FEV1%, FVC%).
Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам соответствовало рав-новесию Харди-Вайнберга и представлено в табл.1. Для полиморфных вариантов генов IL4, IL4RA, GATA3, STAT6 распределение генотипов и аллелей не различались между больными БА и здоровыми индивидами (табл.).
После проведения статистической обработки данных была получена ассоциация генотипа сс гена IL4 (rs 2070874) с повышенным уровнем IgE в сыворотке больных бронхиальной ас-тмой. Остальные полиморфные маркеры не ассоциированы со специфической и полива-лентной сенсибилизацией и уровнем IgE (p>0,05).
По результатам статистической обработки не было получено ассоциации исследуемых полиморфных генов с параметрами легочной функции (PEV%, FEV1%, FVC% (р>0,05).                                                                                                                                      

 

Таблица  

Частота генотипов и аллелей полиморфизмов генов IL4, STAT6, IL4RA, GATA3 в исследуемых группах (в %).

ген	полиморфизм	группа	генотип			p	аллель		p
IL4	С/T	здоровые	С/С	T/C	T/T	0,345	C	T
			54,7	28,2	5,13		78,16	21,84	0,919
		больные	59,3	30,2	5,81		78,05	21,95
STAT 6	C/Т	здоровые	18,6	15,1	46,3	0,251	39,06	60,94	0,322
		больные	18,8	26,5	36,7		33,09	66,9
GATA3	A/G	здоровые	А/A	A/G	G/G	0,07	A	G	0,755
			20,5	19,65	11,9		58,2	41,8
		больные	27,5	34,8	11,63		60,94	39,06
IL4RA	A/G	здоровые	32,56	45,35	20,93	0,131	58,8	41,2	0,637
		больные	30,77	47,01	14,53		55,8	44,12

 

Список литературы:
1. Интерлейкин-5 и бронхиальная астма / Л. М. Огородова, А. Э. Сазонов, И. И. Иванчук, Л. В. Капилевич. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 2006. – 172с.
2. Роль полиморфизма генов цитокинов и их рецепторов в развитии атопической бронхиаль-ной астмы / В. А. Казначеев, Ю. В. Гервазиев // Астма. – 2004. – Т. 5, №  1. – С. 73-84.
3. Using single nucleotide polymorphisms as a means to understanding the pathophysiology of asthma / Lyle J Palmer and William OCM Cookson  // Respiratory research - 2001.