Сибирский Государственный Медицинский Университет, г. Томск
Кафедра иммунологии и аллергологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.
Рост заболеваемости, всё нарастающее разнообразие провоцирующих факторов, недостаточная эффективность существующих методов лечения и профилактики ставят атопический дерматит (АтД) в ряд наиболее актуальных проблем современной медицины. Показатели заболеваемости АтД среди детей в развитых странах колеблется от 4 до 37%. Среди взрослого населения заболеваемость в развитых странах составляет 2-10%.
Иммунные механизмы АтД исследуются всесторонне, но сам феномен атопии включает и неиммунную компоненту – повышение проницаемости кожи при АтД, связанное с нарушением процесса кератинизации вследствие дефекта синтеза филаггрина – фактора дифференцировки кератиноцитов [2]. Ослабление барьерной функции кожи способствует повышенному проникновению аллергенов, хронизации аллергического процесса.
В связи с этим целью данного исследования было количественное определение CD1a+ клеток Лангерганса в эпидермисе и CD68+ клеток (макрофагов) в дерме, а так же оценка особенности их содержания среди больных АтД, сочетающихся с дефектом в гене филаггрина и страдающих только изолированным АтД.
В программу исследования вошли 143 человека (мужчины и женщины) в возрасте от 9 до 47 лет с установленным диагнозом АтД. У 17 из них (основная группа) установлена мутация в гене филаггрина (они составили 11,8%, из которых 9,1% имели делецию 2282del4 и 2,1% - мутацию R501x). Генотипирование проводилось на базе НИИ терапии СО РАМН г. Новосибирск в лаборатории молекулярно-генетических исследований. ДНК из венозной крови выделяли фенол-хлороформной экстракцией по модифицированной методике A. Sambrook et al. [1989]. Анализ на наличие мутации 2282del4 и R501X вблизи начала первого повтора в экзоне 3 гена филаггрина проводился с помощью ПЦР. Для верификации методики генотипирования часть образцов была секвенирована на автоматическом секвенаторе ABI Prism 310 (фирма Perkin-Elmer, США). Остальные больные АтД без генетических дефектов составили группу сравнения. В качестве контрольной группы выступили 20 практически здоровых доноров-добровольцев в возрасте 17-24 лет.
Материалом исследования послужили биоптаты кожи, взятые в периоды ремиссии и обострения. Иммуногистохимическое исследование проводилось с использованием мышиных моноклональных антител к CD1a и CD68 (“Novocastra”). В эпидермисе проводился подсчет клеток Лангерганса, в дерме – CD68-положительных клеток в 1 мм2 в 10 полях зрения.
Статистическая обработка результатов проводилась посредством пакета SPSS. Для сравнения данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, был применен критерий Крускала-Уолиса и критерий Манна-Уитни с уровнем значимости α<0,05.
|
Таблица 1.
Количество CD1a положительных клеток Лангерганса в разных слоях
эпидермиса у больных АтД основной группы и группы сравнения и у здоровых
лиц, Me (Q1-Q3).
|
|
Клетки Лангерганса
|
| |
Верхняя треть эпидермиса |
Средняя треть эпидермиса |
Нижняя треть эпидермиса |
Общее количество клеток |
| Контрольная
группа |
0
(0-0,12)
|
0,95
(0,3-1,35)
|
0
(0-0,12)
|
1
(0,5-1,3)
|
| АтД
с мутациями (основная группа), обострение |
1
(0,4 – 2,8)
|
3,5
(1,6 – 5,8)
|
1,1
(0,4 -1,5)
|
5,5
(5,3 – 7,0)
|
| АтД
(группа сравнения), обострение |
0,3
(0-0,57)
|
3,1
(1 - 5,87)
|
1
(0,37-1,38)
|
4,2
(2,3-7,4)
|
| АтД
с мутациями (основная группа), ремиссия |
0,2
(0-0,3)
|
2
(0,35-3,2)
|
0
(0-0,5)
|
2,8
(2,0-4,2)
|
| АтД
(группа сравнения), ремиссия |
0
(0-0,37)
|
1,6
(0,9-3,8)
|
0
(0-0,27)
|
1,75
(0,4-2,1)
|
Как показало проведенное нами исследование, суммарное количество CD1a+ клеток у больных АтД в группах основной и сравнения в период обострения достоверно превышает в 4 и более раз таковой уровень в контрольной группе. Повышение числа этих клеток, как основных антигенпредставляющих [1], в ответ на антигенную стимуляцию в обострении подтверждает их ключевую роль в инициации иммунного ответа при АтД. Число клеток Лангерганса у пациентов основной группы выше, чем у группы сравнения, за счет трансдермального поступления аллергена из-за недостаточности барьерной функции кожи. Частичное восстановление барьера кожи в стадию ремиссии снижает число CD1a+ клеток, но не возвращает к показателю группы контроля. Можно предположить, что общее повышение числа клеток Лангерганса связано с генетически обусловленной предрасположенностью к атопии. Та же тенденция характерна для распределения CD68+ клеток. Отмечается повышение и в обострении и в ремиссии у больных АтД по сравнению с группой контроля, и еще большее повышение в группе основной, чем в группе сравнения. Этот факт указывает на более выраженные воспалительные процессы при нарушенном кожном барьере вследствие недостаточности филаггрина.
Таким образом, в период обострения АтД у пациентов обеих групп отмечается достоверное повышение CD1a+ и CD68+ клеток по сравнению с людьми, не страдающими АтД, что отражает высокий уровень распределения антигенпредставляющих клеток в коже. У пациентов с мутациями в гене филаггрина зарегистрировано достоверное повышение CD1a+ и CD68+ клеток по сравнению с группами контроля и сравнения, что говорит о более высоком уровне готовности к инициации иммунных ответов в ответ на аллерген у больных атопическим дерматитом на фоне мутации в гене филаггрина.
Список литературы:
1. Афанасьев, Ю. И. Гистология / Ю. И. Афанасьев, Н. А. Юрина, Е. Ф. Котовский. - М.: Медицина, 2001. – 744 с.
2. Мутации в гене филаггрина как предрасполагающий фактор развития атопического дерматита / Саликова Т. И., Климов В. В., Денисов А. А. // Клиническая дерматология и венерология. – 2010. - №3. – C. 4-7.
|
