|
Сибирский государственный медицинский
университет, г. Томск
НИИ медицинской генетики, г. Томск
Лаборатория популяционной генетики
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 71-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 14-16 мая 2012 г.), под ред. В. В. Новицкого, Н.В. Рязанцевой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2012. − 335 с.
Скачать сборник (MS Word, 1 мб)
Скачать программу конференции
Актуальность. В настоящее время
накапливаются работы, посвященные установлению важности эпигенетических
модификаций генома (модификация гистоновых белков, интерференция РНК и
метилирование ДНК) в реализации и прогрессии фенотипов сердечно-сосудистых
заболеваний. Один из подходов в решении данного вопроса представлен изучением
статуса метилирования ДНК в тканях при патологии.
Наиболее
вероятными кандидатами для тестирования нарушений статуса метилирования
являются импринтированные гены, в том числе ген H19. В 5'-районе гена
расположены дифференциально метилированные CTCF-связывающие сайты (DMR),
которые контролируют его импринтинг и экспрессию. В соматических клетках на
отцовском аллеле DMR регион метилирован, что предотвращает транскрипцию H19, в
то время как на материнском - неметилирован и ген экспрессируется в
клетках-потомках. Биаллельная экспрессия гена наблюдается в лейкоцитах периферической
крови у больных с патологией почек и гипергомоцистеинемией (фактором риска
сердечно-сосудистых заболеваний). Увеличение экспрессии H19 также выявлено в
тканях из области атеросклеротических бляшек человека. Однако исследования,
посвященные анализу статуса метилирования гена Н19 в тканях сосудистой стенки у
человека, ранее не проводились.
Цель. Оценить статус метилирования DMR
региона гена Н19 в образцах тканей сонных артерий у больных атеросклерозом.
Материал и методы. Формирование
репрезентативных выборок больных атеросклерозом проходило на базе ФГБУ 'НИИ
комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний' СО РАМН (г. Кемерово).
Всего в группу обследования вошли 54 русских мужчины (возраст 49-79 лет).
Инсульт или транзиторные ишемические атаки в анамнезе регистрировались у 19
(35,2%) индивидов. Кроме этого, все 54 пациента имели ишемическую болезнь
сердца и артериальную гипертензию, а у 24 (44,4%) из них диагностирована
хроническая ишемия нижних конечностей.
Из
биоптатов тканей сонной артерии, полученных в результате каротидной эндартерэктомии,
был создан банк. У каждого больного взяты образцы из двух областей сосудистой
стенки: атеросклеротическая бляшка и предлежащая макроскопически неизмененная
ткань.
Для
выделения ДНК из тканей сонных артерий использовался стандартный метод обработки
протеиназой К и фенол-хлороформной экстракции.
Анализ
статуса метилирования DMR региона гена Н19 проводился с использованием метода
комбинированного бисульфит-рестрикционного анализа (СOBRA). Бисульфитная обработка
ДНК производилась с использованием набора 'EZ DNA MethylationT Kit' ('Zymo
Research', США) по стандартному протоколу производителя. Структура праймеров,
которая использовалась для амплификации модифицированной ДНК, была опубликована
в литературе ранее. Далее ПЦР продукт подвергали гидролизу рестриктазой Taq I
('Fermentas', Литва) при оптимальной для фермента температуре в течение 16 ч.
Разделение продуктов реакции производилось в 3% агарозном геле с добавлением
бромистого этидия. Детекция фрагментов ДНК осуществлялась в проходящем
ультрафиолетовом свете с помощью гель документирующей установки 'Gel Doc 2000'
('Bio-Rad', США).
Результаты. В результате настоящего
исследования не выявлено аберрантного метилирования DMR региона гена H19 в
тканях из области атеросклеротических бляшек и предлежащей макроскопически
неизмененной стенки сонных артерий у тех же самых больных.
Выводы. Таким образом, установлено, что
статус метилирования DMR региона гена H19 не является важной детерминантой
атеросклеротического поражения сосудов у человека.
|
