|
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Научно-исследовательский институт медицинской генетики ТНЦ СО РАМН,
г. Томск
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 67-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2008 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,2 мб)
Цирроз печени является
серьёзным осложнением хронических гепатитов. Было замечено, что у разных людей
период формирования фиброза в печени может тянуться от нескольких лет до
нескольких десятилетий. Такой временной разброс можно объяснить разными
причинами, в том числе генетической предрасположенностью организма. В развитии
фиброза важным является адекватный иммунный ответ. Большая роль в этом процессе
отводится различным цитокинам, которые регулируют синтез многих ферментов и
определяют течение воспалительного процесса. Так известно, что синтез
коллагеназы активируется интерлейкинами 1, 6, 10, β- и γ-интерфероном, фактором
некроза опухолей α (ФНОα), а тормозится интерлейкинами 4, 11, 13. В данной
работе рассмотрены полиморфные варианты генов фактора некроза опухолей α (TNFα) и рецептора к
интерлейкину 4 (IL4RA).
Целью работы было
выяснить влияют ли полиморфные варианты генов TNFα (G-308A) и
IL4RA(Ile50Val)
на скорость фиброгенеза у больных хроническим гепатитом.
ФНОα играет роль как в
развитии острого воспалительного процесса ( активация фагоцитоза), так и в
хронизации процесса за счет увеличения адгезии макрофагов. Ген TNFα картирован на 6 хромосоме (6р21.3). Он имеет 3 интрона и 4
экзона, его размер 2762 нуклеотидные пары. Известно больше 30 вариантов этого
гена. В работе описывается полиморфизм в промоторной области гена (G-308A).
Интерлейкин 4 (ИЛ-4)
отвечает за дифференцировку СD4+ Т-клеток в хелперы второго типа, влияет на
образование антител и ограничивает интенсивность воспаления. Функционирование
ИЛ-4 невозможно без его рецептора. Рецептор состоит из двух субъединиц α и γ.
Альфа субъединица связывается с ИЛ-4 и передает от него сигнал внутрь клетки, а
гамма – взаимодействует с различными регуляторами этого процесса. Ген IL4RA картирован на 16 хромосоме (16p12.1-p11.2) и содержит 9 экзонов. Изучаемый полиморфизм (Ile50Val)
находится на участке гена, ответственного за синтез α-субъединицы.
Было обследовано 382
жителя г. Томска, из них 128 здоровых людей (контрольная группа), 202 человека
с циррозом печени разной этиологии и 52 человека с первой стадией фиброза.
ДНК выделяли по
стандартной неэнзиматической методике из лимфоцитов периферической крови.
Изучение полиморфных вариантов исследуемых генов проводили с помощью
амплификации необходимых участков методом полимеразной цепной реакции. Продукты
амплификации обрабатывали специфическими рестриктазами. Продукты рестрикции
фракционировали в 3% агарозном геле при напряжении 90-120 В в течение 35-70
минут. Фрагменты ДНК окрашивали бромистым этидием и визуализировали в
ультрафиолетовом свете.
Распределение генотипов
проверяли на соответствие закону Харди-Вайнберга с помощью критерия χ2 . Для сравнения частот генотипов и аллелей
между исследуемыми группами использовали критерий χ2 с поправкой Йется на
непрерывность.
Распределение генотипов
по двум исследуемым полиморфизмам во всех группах обследуемых людей
соответствует равновесию Харди-Вайнберга.
В результате сравнения
частот генотипов и аллелей с помощью критерия χ2 были получены
результаты, которые представлены в таблице 1. Значимые различия были обнаружены
только по гену TNFα: между контрольной группой и группой пациентов
с I стадией фиброза, как по частоте генотипов (р=0,006), так и
по частоте аллелей (р=0,003) и между
группой пациентов с I стадией фиброза и циррозом печени по частоте
генотипов (р=0,0038) и по частоте аллелей (р=0,006). При этом частота встречаемости аллеля А в группе
пациентов с I стадией фиброза (24,5%) получилась выше, чем в стадию цирроза
печени (12,9%), и выше чем в контрольной выборке (11,2%). Это можно объяснить
тем, что этот аллель обладает гепатопротекторным действием и замедляет процесс
формирования соединительной ткани. В результате экспрессии аллеля А будет
вырабатываться меньшее количество фактора некроза опухолей, а следовательно
будет ослаблено его влияние, как активатора процесса фиброгенеза.
Таким образом, в работе
было показано защитное влияние аллеля А
гена TNFα (G-308A), в тоже время
какая-либо роль полиморфизма гена IL4RA
(Ile50Val) выявлена не была.
Таблица 1
Распределение частот
генотипов и аллелей в исследуемых группах.
|
Ген
|
Полиморфизм
|
Генотип
|
Группы обследуемых
|
Р
|
|
Контрольная группа
|
I стадия фиброза
|
Цирроз печени
|
Контроль и I стадия фиброза
|
Контроль и цирроз печени
|
I стадия фиброза и
цирроз печени
|
|
N
|
%
|
N
|
%
|
N
|
%
|
|
IL4RA
|
Ile50Val
|
Ile/Ile
|
42
|
32,8
|
19
|
36,5
|
71
|
36,0
|
0,153
|
0,603
|
0,389
|
|
Ile/Val
|
66
|
51,6
|
29
|
55,8
|
90
|
45,7
|
|
Val/Val
|
20
|
15,6
|
4
|
7,7
|
36
|
18,3
|
|
Val
|
106
|
42,1
|
37
|
35,6
|
162
|
41,1
|
0,142
|
0,681
|
0,361
|
|
TNF
|
G308A
|
GG
|
98
|
78,4
|
29
|
59,2
|
152
|
75,2
|
0,006*
|
0,806
|
0,0038*
|
|
GA
|
26
|
20,8
|
16
|
32,6
|
58
|
23,8
|
|
AA
|
1
|
0,8
|
4
|
8,2
|
2
|
1,0
|
|
A
|
28
|
11,2
|
24
|
24,5
|
52
|
12,9
|
0,003*
|
0,798
|
0,006*
|
N –
абсолютное число наблюдаемых генотипов и аллелей; р – уровень значимости, полученный тестом χ2.
Список литературы:
1. Влияние промоторного
полиморфизма гена TNFα (G308A)
на уровень фактора некроза опухолей альфа в сыворотке крови при хронических
заболеваниях лёгких и печени. / И. А. Гончарова // Генетика человека и
патология. Сборник научных трудов ГУ НИИ Медицинской генетики ТНЦ СО РАМН. –
Томск, 2008. - С. 67.
2. Анализ связи
полиморфизма Ile50Val гена рецептора
интерлейкина-4 (IL4RA) с хроническим вирусным гепатитом / И. А. Гончарова, М.
Б. Фрейдин, Л. Е. Дунаева, Е. В. Белобородова, Э. И. Белобородова, В. П.
Пузырёв // Молекулярная биология. – 2005. - Т. 39, № 3 - С. 379-384.
3. Современные представления
о патогенезе, диагностике и лечение фиброза печени. / Ч. С. Павлов, Ю. О.
Шульпекова, В. Б. Золотаревский, В. Т. Ивашкин // Российский журнал
гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2005. - № 2. – С. 12-13.
4. Cytokine gene polymorphisms
and the susceptibility to liver cirrhosis in patients with chronic hepatitis C.
/ M. J. Bahr, M. Menuawy, K. H. Boeker et al // Liver Int. –
2003. - № 23. - С. 420-425.
|
