Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Культуры перитонеальных макрофагов, фибробластов и клеток Нер-2 широко используются для решения широкого круга задач в биологии и медицине [1; 2; 3]. Микроядерный анализ является важной составляющей при таких исследованиях [4], а исходный количественный состав клеточных культур значительно влияет на адекватность моделирования процессов взаимодействия и функционирования клеток [2]. Цель исследования заключалась в изучении влияния концентрации посадки клеток на активность формирования микроядер в полинуклеарных и одноядерных клетках в культурах перитонеальных макрофагов (выделенных из брюшной полости мышей линии CBA), фибробластов (полученных от мышей инбредной линии C3H/He) и клеток культуры Нер-2.
Концентрация посадки клеток в культурах контрольных групп составляла, соответственно 1000 тыс. перитонеальных клеток, 100 тыс. фибробластов, и 100 тыс. клеток культуры Нер-2 в 1 мл взвеси. Данные концентрации посадки клеток является стандартными для указанных культур. В культурах экспериментальных групп концентрация посадки клеток была снижена в 2 раза. Подсчитывали количество полинуклеарных и одноядерных клеток, имевших в своем составе микроядра. Результаты оценивали на 24, 48 и 72 часа инкубации. Снижение концентрации посадки макрофагов в группе культур СВА в 2 раза приводила к увеличению числа полинуклеарных клеток с микроядрами в 1,8 раза через 24 часа инкубации. В отношении одноядерных клеток данная тенденция не наблюдалась. Было показано, что в группах культур с высокой концентрацией посадки клеток количество макрофагов с микроядрами не изменялось на все сроки инкубации. Снижение концентрации посадки фибробластов в 2 раза не вызывало достоверного изменения количества клеток с микроядрами, что характерно как для одноядерных, так и для многоядерных клеток. Однако в многоядерных фибробластах процесс формирования микроядер протекал значительно активнее (в 13,3 раза), чем в одноядерных, что не зависело от концентрации посадки клеток. В культурах клеток Нер-2 отсутствовали достоверные межгрупповые различия показателей частоты встречаемости клеток с микроядрами на все сроки инкубации. Это было характерно для полинуклеарных и одноядерных клеток.
Таким образом, определена зависимость частоты появления микроядер только в полинуклеарных макрофагах в ответ на снижение концентрации посадки клеток in vitro. Уменьшение концентрации посадки фибробластов не приводило к достоверному изменению численности многоядерных и мононуклеарных клеток, имевших в своем составе микроядра. Аналогичная ситуация наблюдалась в отношении клеток культуры Нер-2. Выявленные различия в частоте встречаемости микроядер были обусловлены изменением концентрации посадки клеток. Полученные результаты могут быть использованы для изучения влияния концентрации посадки клеток на активность образования микроядер in vitro при проведении различного рода биологических и медицинских исследований.

 

 

Список литературы:
1. Ильин Д.А., Архипов С.А. Морфоцитологические аспекты взаимодействия клеток в генетически гетерогенных клеточных культурах // Компенсаторно-приспособительные процессы: Всероссийская конференция. Новосибирск, 2004. – С. 32-33.
2. Ильин Д.А., Архипов С.А Сравнительная оценка функциональной и интегративной активности макрофагов и лаброцитов в генотипически различных культурах перитонеальных клеток // VII всероссийская конференция по патологии клетки. Москва, 2005. – С. 56 – 57.
3. Maier A.B., Westendorp R.G., VAN Heemst D. beta-Galactosidase Activity as a Biomarker of Replicative Senescence during the Course of Human Fibroblast Cultures // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2007. - V. 1100. - P. 323-332.
4. Moore F.R., Urda G.A., Krishna G., Theiss J.C. An in vivo/in vitro method for assessing micronucleus and chromosome aberration induction in rat bone marrow and spleen. 1. Studies with cyclophosphamide // Mutat. Res. - 1995. - V. 335. - № 2. - Р. 191-199.