Кубанский государственный университет

Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 1), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

Коллагеназы –  ферменты, которые катализируют гидролиз нативного коллагена при нейтральной или щелочной реакции среды и физиологических значениях температуры. На основании работы с синтетическими пептидами установлено, что коллагеназы гидролизуют субстраты, имеющие остатки пролина или оксипролина в определенном положении относительно чувствительной связи [1].
Очевидно существование двух групп ферментов с общим названием «коллагеназы». Первая – это металлоферменты, выделяемые из микробных источников и соединительных тканей животных, они ингибируются ЭДТА,
о-фенантролином, цистеином. Другая группа – это ферменты пищеварительных органов животных, гомологичные трипсину, химотрипсину, эластазе. Они нечувствительны к ингибиторам металлопротеиназ и относятся к семейству сериновых протеиназ [2].
Исследования пищеварительных коллагеназ беспозвоночных и низших позвоночных животных показали, что коллагенолитической активностью могут обладать как трипсино-, так и химотрипсиноподобные протеиназы.
Нами были исследованы коллагеназы пищеварительного тракта белого толстолобика Hypophthalmichthys molitrix Val. Очистку фермента проводили с использованием методов осаждения сульфатом аммония, гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, изоэлектрического фокусирования. В качестве субстрата для определения активности коллагеназы  использовали азоколлаген.
Активностью коллагеназы в гепатопанкреасе белого толстолобика обладает преимущественно один фермент, изоэлектрическая точка которого находится при
рН 9,4. Кроме этого, незначительную активность проявляют также ферменты с рI 4,9 и 6,9. Фермент с рI 9,4 гидролизует также казеин и синтетические субстраты трипсина, является минорной трипсиноподобной протеиназой, на долю которой приходится более 80% активности коллагеназы. Трипсиновая и коллагеназная активности выходят различными, хотя и сильно перекрывающимися пиками при гель-фильтрации на сефадексе G-75, поэтому разделить эти ферменты по молекулярной массе не удалось. Молекулярная масса коллагеназы гепатопанкреаса определена нами как 22000±600 Да. Активность коллагеназы гепатопанкреаса карпа обусловлена действием единственного фермента с рI 6,8, гидролизующего также специфические субстраты химотрипсина и эластин; его молекулярная масса 21400 Да [3].
Оптимум рН стабильности коллагеназы белого толстолобика довольно широк – от 5,5 до 9,0, наиболее активен фермент при рН 8,5. В ходе ингибиторного анализа было установлено, что на активность коллагеназы не влияет ЭДТА, но она угнетается такими ингибиторами, как фенилметилсульфонилфторид и соевый ингибитор трипсина. Это позволило отнести данный фермент к семейству сериновых протеиназ.
В слизистой оболочке кишечника при использовании метода гель-хроматографии обнаружили две фракции,  обладающие коллагеназной активностью, различные по молекулярной массе.

ЛИТЕРАТУРА
1.    Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. – М.: Наука, 1971.
2.    Seifter S., Happer E. Collagenases. In: Methods in Enzymology. Vol. 19 N.Y. – L.: Acad. Press. – 1970.
3.    Хаблюк В.В., Проскуряков М.Т. Особенности пищеварительных ферментов карпа. М., 1983. Рукопись депонирована в ВИНИТИ. № 1774-83
Деп. 1983. № 9.