Читинская государственная медицинская академия

В настоящее время известны несколько десятков веществ растительной природы, действующих избирательно на мононуклеарные клетки крови человека (Щепеткин И.А., 2004). Они могут связываться с высокоселективными рецепторами на поверхности мембран моноцитов/макрофагов и вызывать специфические биологические эффекты. Показано, что одним из основных механизмов иммуностимулирующего и противоопухолевого действия растительных препаратов является их прямое влияние на макрофаги и систему комплемента (Смолина Т.П. и др. (2001), Wasser S.P., (2002)).
Целью исследования явилось изучение влияния экстрактов лекарственных трав на продукцию мононуклеарными клетками периферической крови здоровых людей белков комплемента С3, С5, С1-инг и фактора Н, а также оксида азота (NO) in vitro.
Мононуклеарные клетки (МНК) из крови доноров выделяли в двойном градиенте плотности фиколл-урографина («Pharmacia», ?=1,077 г/см3, ?=1,086 г/см3) на границе раздела фаз и культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 5% эмбриональной телячьей сыворотки («ПанЭко», Москва), 2 мМ L-глутамина и 80 мкг/мл гентамицина («Ферейн»). Рабочая концентрация МНК – 106 клеток/мл. Синтетические процессы в клетках индуцировали внесением экстрактов, полученных методом (Андреева Т.И., 2004), контролем служили МНК без добавления экстрактов. Оптимальные дозы были выбраны на основании данных литературы и собственных исследований. В работе использовали экстракты следующих растений: пятилистника кустарникового (ПК) (Penthaphylloides fruticosa), бадана толстолистного (БТ) (Bergenia crassifolia), горечавника бородатого (ГБ) (Gentianopsis barbata), шлемника байкальского (ШБ) (Scutellaria baicalensis), зопника клубненосного (ЗК) (Phlomis tuberosa), девясила высокого (ДВ) (Inula helenium), шиповника даурского (ШД) (Rosa dahurica Pall), облепихи крушиновидной (ОК) (Hippophae rhamnoides). Суспензию клеток в объеме 0,5 мл вносили в полипропиленовые пробирки «Eppendorf» и инкубировали в течение 18 ч при 37°С в атмосфере с 5% СО2 при регулярном помешивании. Контроль жизнеспособности клеток осуществляли методом окрашивания трипановым синим («Lachema»). По окончании культивирования МНК осаждали центрифугированием при 400 g в течение 15 минут и в полученных супернатантах методом ИФА определяли содержание белков комплемента («Цитокин»), а также уровни метаболитов NO (нитриты/нитраты) методом П.П. Голикова (2004). Статистический анализ данных проведен в программе «Biostat»
Не все исследуемые экстракты оказывали действие на изучаемые клетки. Стимулирующим эффектом на выработку С3 обладали экстракты ОК и ГБ (р<0,05 по сравнению с контролем), причем при сравнении у первого действие в 5 раз продуктивнее второго (р<0,01). Генерацию синтеза С5 вызывал только экстракт ОК, но значение р было больше 0,05. Содержание С1-ингибитора не менялось при любом варианте использования предполагаемых эффекторов. Влияние на продукцию фактора Н оказывали три экстракта: ШБ, ПК и БТ, причем в такой же последовательности сила воздействия возрастала (р<0,05 по сравнению с контролем).
Что касается влияния на продукцию стабильных продуктов метаболизма оксида азота (NO), то статистически значимо усиливали их синтез экстракты ШД, ГБ, ШБ (р<0,01), ОК и БТ (р<0,05), причем наиболее значительный прирост количества метаболитов нитратов/нитритов вызывал ШД (в 6 раз).
Учитывая то, что оксид азота вовлечен в процессы вазодилатации, ингибирования агрегации тромбоцитов, антипролиферативное действие цитокинов, может реагировать с супероксидным радикалом и некоторыми системами, активирующими циклооксигеназу (синтез Pg), активировать гуанилатциклазу (неоптерин) и т.д., становится актуальным исследование в этом направлении.
Данные, полученные при стимуляции МНК периферической крови здоровых доноров различными экстрактами, можно использовать в оценке функционального состояния клеток врожденного иммунитета. Изучение механизмов воздействия экстрактов лекарственных трав на эффекторные клетки позволяет, если не полностью объяснить, то хотя бы прояснить точки приложения их действия в комплексном влиянии лекарственных трав на оздоровление человека.