|
Сибирский государственный медицинский
университет, г. Томск
Кафедра биохимии и молекулярной биологии
НИИ фармакологии СО РАМН, г. Томск
Лаборатория
иммунофармакологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 71-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 14-16 мая 2012 г.), под ред. В. В. Новицкого, Н.В. Рязанцевой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2012. − 335 с.
Скачать сборник (MS Word, 1 мб)
Скачать программу конференции
Актуальность. Особое внимание
исследователями уделяется изучению фенольных соединений, которые обладают
высокой антиоксидантной активностью и принимают участие в различных
физиологических процессах.
Цель. Изучить влияние полифенольных
соединений на фагоцитарную активность макрофагов перитонеального экссудата в
норме и в условиях цитостатической иммуносупресии.
Материал и методы. В ходе работы было
использовано 40 мышей-самцов линии CBA Ca/ Lac в возрасте 8-12
недель.Исследование проводилось в 2 этапа: на первом этапе использовались 4
группы животных: контрольная группа, опытные группы мышей, получавших исследуемые
препараты и группа препарата сравнения. Животным опытных групп в течение 5 дней
вводили перорально полифенольные соединения календулы лекарственной и сафлора
красильного в дозе 50 мг/кг. Препаратом сравнения в данном эксперименте служила
настойка эхинацеи пурпурной, которую так же вводили перорально в течение 5 дней
в дозе 50 мг/кг. В качестве контроля использовали животных, получавших равный
объем растворителя.
На втором
этапе исследования у животных всех 4 групп моделировали иммунодефицитное
состояние с помощью инъекции препарата циклофосфана в дозе 250 мг/кг. Далее
вводили исследуемые полифенолы и препарат сравнения по схеме указанной выше.
Для получения
макрофагов собирали перитонеальный экссудат в силиконизированную пробирку,
центрифугировали 5 мин при 2000 об/мин для осаждения клеток, убирали надосадочную
жидкость, а к осадку добавляли 50 мкл раствора Хенкса, после чего клетки ресуспендировали.
Определение активности перитонеальных макрофагов проводили с помощью НСТ
теста.
На предметное
стекло наносят 50 мкл клеточной суспензии, добавляют 25 мкл НСТ. В спонтанном
тесте вносят 25 мкл раствора Хенкса, в стимулированном - 25 мкл пирогенала.
Затем инкубируют во влажной камере в течение 45 мин при 370С. Смывают 500 мкл
раствора Хенкса, фиксируют в растворе Майн-Грюнвальда в течение 3-4 минут,
сушат. Окрашивают 1% нейтральным красным в течении 3 мин. Подсчет проводят под
иммерсионным микроскопом, объектив 90, окуляр 10-15 с иммерсионным маслом.
Оценивают процент активных и неактивных фагоцитов.
Результаты. Фагоцитарная активность
перитонеальных макрофагов у мышей линии CBA Ca/Lac при спонтанном фагоцитозе
составила 26,5%. Введение животным полифенольных соединений, выделенных из
календулы, приводило к достоверному увеличению данного показателя до 40%, а
сафлора до 43,8%. В группе сравнения восстанавливать НСТ оказались способны
46,4% макрофагов.
Введение
противоопухолевого препарата приводило к достоверному снижению активности
перитонеальных фагоцитов до 21,2%, относительно группы контроля. При сочетанном
применении циклофосфана и полифенольных соединений, выделенных из сафлора и
календулы, уровень спонтанного фагоцитоза составил 37,4% и 42,6%
соответственно. Активность перитонеальных макрофагов при совместном применении
цитостатика и настойки эхинацеи повысилась до 44,3 % относительно группы мышей,
получивших только противоопухолевый препарат.
Степень
фагоцитарной активности макрофагов перитонеального экссудата мышей линии CBA
Ca/Lac при восстановлении НСТ в присутствии пирогенала составила 35 %. Введение
животным полифенольных соединений, выделенных из сафлора и календулы приводило
к существенному повышению уровня данного показателя до 53,8 и 49%
соответственно. При этом степень активации фагоцитов в группе мышей, получавших
настойку эхинацеи пурпурной, составила 52,4%.
Инъекция
животным цитостатика приводила к достоверному снижению уровня стимулированного
фагоцитоза относительно группы интакта до 25,8 %. При сочетанном применении
настойки эхинацеи пурпурной и цитостатика уровень изучаемого показателя
составил 49,5%, что существенно превышало фагоцитарную активность перитонеалов
группы мышей, получивших только противоопухолевый препарат. При совместном
применении полифенольных соединений и циклофосфана восстанавливать НСТ
оказались способны 59% активизированных макрофагов животных группы календулы и
38,6% сафлора.
Выводы. Таким образом, полифенольные
соединения, выделенные из календулы и сафлора обладают иммуностимулирующим и
иммунокоррегирующим действием, превосходящим по степени выраженности препарат
сравнения настойку эхинацеи пурпурной.
|
