Использование шлемника байкальского в народной медицине известно с глубокой древности. Препараты шлемника применяются для лечения сердечно-сосудистых, аллергических и ряда инфекционных заболеваний, а также при нарушении деятельности центральной нервной системы. Обращает внимание и широкое использование препаратов шлемника байкальского в качестве тонизирующего, стимулирующего и общеукрепляющего средства [2]. В ряде работ сотрудников НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН было показано, что использование жидкого экстракта шлемника байкальского (ЭШБ) при химиотерапии животных с опухолями приводит к повышению противоопухолевого и противометастатического эффектов цитостатиков и снижает их лейкопенический эффект [1]. Однако механизмы действия этого препарата, используемого для повышения эффективности противоопухолевой терапии, на систему иммунитета исследованы недостаточно. Остается "открытым" вопрос о возможности применения ЭШБ как средства дополнительной терапии онкологических заболеваний в сочетании с классическими методами лечения (химиотерапией).
Исследования ряда показателей иммунной системы у мышей в норме были проведены на 138 мышах-самцах линии CBA/CaLac. В работе использовали жидкий экстракт шлемника байкальского (ЭШБ), который вводили через зонд в желудок курсом в течение 5 дней, в дозе 1 мл/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды. Иммунизацию животных осуществляли корпускулярным тимусзависимым антигеном - эритроцитами барана (ЭБ), однократно внутрибрюшинно по 0,2 мл 15% взвеси эритроцитов. Были исследованы: фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов (ФАПМ), содержание антителообразующих клеток в селезенке (АОК), уровень гемагглютининов в сыворотке крови, интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), пролиферативная активность Т- и В- лимфоцитов. Изучение влияния ЭШБ на опухолевый процесс осуществляли на 292 мышах-самцах линии Б1(СВАХС57В1/6). В качестве экспериментальной модели злокачественного роста была использована карцинома легких Льюис (LLC), которую перевивали в мышцу задней лапы взвесью клеток в количестве 5-6х106 на мышь. Циклофосфан (ЦФ) вводили мышам однократно внутрибрюшинно в дозе 125 мг/кг на 12-е сут после трансплантации опухоли. ЭШБ вводили мышам, начиная с 6 суток после трансплантации опухоли и далее в течение 12 дней в той же дозе, что и первой экспериментальной группе животных. Изучалась противоопухолевая активность как одного ЭШБ, так и в комбинации с циклофосфаном. Оценивалась цитотоксическая активность естественных киллерных клеток (ЕКК) [3] и перитонеальных макрофагов [4] мышей-опухоленосителей. Тестирование ФНО-а, ИЛ-1Р, ИФН-у, ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-10 в культуральных супернатантах перитонеальных макрофагов и не прилипающих к пластику спленоцитов проводилось твердофазным иммуноферментным методом "сэндвича" (ELISA) на 13-е, 15-е, 17-е, 19-е и 22-е сут после трансплантации опухоли. Контрольным животным вводили соответствующий объем растворителя. В качестве фона использовали интактных мышей соответствующего пола и возраста. Полученные в ходе исследования данные обрабатывали методом вариационной статистики, используя пакет статистических программ "Statistica for Windows".
При изучении влияния ЭШБ на иммунную систему здоровых мышей линии CBA/CaLac было показано, что исследуемый препарат оказывал стимулирующее действие, как на гуморальный, так и на клеточный иммунный ответ. Так, введение ЭШБ увеличивало содержание АОК в селезенке мышей на 4-е сут эксперимента, повышало уровень гемагглютининов в сыворотке крови на 4-е, 7-е, 14-е сут опыта и усиливало интенсивность реакции ГЗТ (до применения сенсибилизирующей дозы антигена) по сравнению с контролем. Кроме того, курсовое введение ЭШБ при иммунизации животных ЭБ вызывало увеличение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов на ранние сроки эксперимента относительно контрольной группы мышей. При исследовании влияния ЭШБ на пролиферативную активность лимфоцитов была выявлена способность изучаемого препарата стимулировать спонтанную бласттрансформацию лимфоидных клеток.
В связи с выявленными эффектами изучаемого препарата на систему иммунитета в дальнейших экспериментах проводилось исследование ЭШБ на наличие противоопухолевой и антиметастатической активности, а также изучение эффектов этого препарата в комбинации с цитостатиком.
Было установлено, что курсовое введение мышам с карциномой легких Льюис ЭШБ вызывало достоверное уменьшение массы опухоли на 22-е сут развития неопластического процесса. Сочетанное применение препарата шлемника байкальского и цитостатика для лечения мышей с карциномой легких Льюис усиливало противоопухолевое действие последнего на 22-е сут после трансплантации опухоли, а также приводило к ингибированию процесса дессиминации LLС в легкие по сравнению с контролем на 17-е, 19-е и 22-е сут эксперимента, а также по сравнению с группой мышей, получавших циклофосфан, на 19-е и 22-е сут опыта.
Курсовое применение ЭШБ оказывало модулирующее воздействие на цитотоксическую активность клеток-эффекторов системы естественной резистентности. Так, на 13-е, 17-е сутки после трансплантации опухоли ЭШБ снижал гиперактивацию перитонеальных макрофагов, вместе с тем в терминальную стадию опухолевого процесса (19-е сут) экстракт шлемника байкальского оказывал стимулирующее влияние на активность макрофагов. Исследуемый препарат незначительно стимулировал цитотоксическую активность ЕКК селезенки на 13-е, 15-е, и 19-е сут, при этом на 17-е, 22-е сут исследования ЭШБ снижал индекс цитотоксичности ЕКК. Комбинированное введение циклофосфана и ЭШБ приводило к волнообразному изменению цитотоксической активности перитонеальных макрофагов (соотношение эффектор/мишень 10:1). Так, снижение индекса цитотоксичности на 17-е сут исследования, сменялось значительным увеличением данного показателя на 19-е и 22-е сут эксперимента. При исследовании влияния комбинации двух препаратов на цитотоксическую активность ЕКК наблюдалась противоположная тенденция: после повышения индекса цитотоксичности ЕКК на 13-е и 15-е сут после трансплантации опухоли (соотношение эффектор/мишень 100:1) наблюдалось снижение исследуемого показателя на поздние сроки развития опухоли, хотя и недостоверное относительно контроля. Введение мышам с карциномой легких Льюис ЭШБ вызывало повышение продукции ИЛ-1Р и ФНО-а перитонеальными макрофагами лишь в терминальную стадию опухолевого процесса. Сочетанное применение ЭШБ и циклофосфана приводило к более выраженному усилению выработки ИЛ-1Р и ФНО-а перитонеальными макрофагами по сравнению с группой контроля, но также лишь на поздние сроки злокачественного роста. Введение ЭШБ корректировало на некоторые сроки нарушенный баланс цитокинов, продуцируемых Т-хелперами селезенки мышей с опухолью. Так, выработка ИЛ-2 усиливалась (19-е сут), а продукция ИЛ-4 снижалась (15-е сут) по сравнению с контрольной группой животных. Вместе с тем, ведение ЭШБ оказывало стимулирующее влияние на продукцию ИЛ-10 лимфоидными клетками селезенки на протяжении практически всего периода наблюдения. Сочетанное применение циклофосфана и ЭШБ приводило к повышению продукции ИФН-у, играющему важную роль в противоопухолевой резистентности организма, и ИЛ-2. Однако при этом происходило и усиление выработки ИЛ-4 и ИЛ-10, уровень которых и без того был высоким у животных-опухоленосителей (табл.).
Результаты проведенных исследований позволяют отнести жидкий экстракт шлемника байкальского к модификаторам биологических реакций из-за способности исследуемого препарата модулировать функциональную активность эффекторов системы иммунитета (ЕКК и макрофагов), корректировать нарушенный баланс цитокинов, при наличии у него противоопухолевого и антиметастатического эффекта. Данные, полученные в исследованиях на группе животных с сочетанным введением циклофосфана и ЭШБ свидетельствуют о возможности использования ЭШБ как средства дополнительной терапии при специфическом (химиотерапия) лечении злокачественных новообразований, т. к. ЭШБ потенцирует противоопухолевое и антиметастатическое действие циклофосфана и нивелирует иммуноцитотоксический эффект последнего.