|
Воронежский государственный университет (г. Воронеж)
Эта работа опубликована в сборнике "Науки о человеке": материалы Х конгресса молодых ученых и специалистов / Под ред. Л.М.
Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2009. – 166 с.
Скачать сборник целиком
Анализ литературы за последние 10 лет показал, что при контроле качества лекарственных препаратов, содержащих витамин Е, предпочтение отдается физико-химическим методам, как наиболее экспрессным, чувствительным и информативным [1,2]. Более объективный качественный и количественный анализ позволяют получить хроматографические методы, из которых наибольшее распространение получили тонкослойная хроматография (ТСX) [1] и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖX) [1,2]. ВЭЖX - наиболее быстрый и точный метод анализа жирорастворимых витаминов [1,2]. Однако, следует отметить, что высокая стоимость оборудования и нехватка квалифицированных кадров существенно ограничивает практическое использование метода ВЭЖX [2]. Метод ТСX в настоящее время в фармацевтическом анализе применяют для оценки подлинности и чистоты субстанций и лекарственных форм. В последнее время стали появляться публикации, свидетельствующие о возможности количественного анализа данных ТСX с применением специализированного программного обеспечения.
В ТСX на процесс хроматографирования влияют существенным образом растворитель, сорбент и условия анализа [3]. Поэтому целью настоящей работы явилось изучение различных элюирующих систем и оптимальных условий хроматографирования, позволяющих провести определение витамина Е методом ТСX.
Выбор проявителя осуществляли с учетом таких требований как специфичность, высокая чувствительность, доступность и высокое качество получаемой картины. В качестве реагентов для обнаружения пятен витамина Е были использованы: 5 % спиртовый раствор фосфорномолибденовой кислоты (ФМК); 10 % спиртовый раствор гексацианоферрата калия (III); реактив Эммера - Энгеля; спир-товый раствор нитрата серебра [1]; конц. азотная кислота [4]. Как известно, ФМК является неспецифичным проявителем и кроме витамина Е обнаруживает многие другие компоненты и примеси в виде темно-синих пятен на желто-зеленом фоне. Экспериментально установлено, что раствор ферро-цианида калия (III) не обладает достаточной чувствительностью и не может быть использован для этих целей. Использование нитрата серебра, как детектирующего реагента, экономически нецелесообразно, ввиду его высокой рыночной стоимости. Впервые, в качестве проявителя, была выбрана конц. азотная кислота, которая с витамином Е образует окрашенное в оранжево-красный цвет соединение - о-токоферилхинон [4]. Кроме того, обработанные этим реагентом хроматограммы не изменяют интенсивности окраски с течением времени. Этот детектирующий агент - высокочувствительный, специфичный и доступный.
Было изучено восемь типов элюирующих систем с различными значениями полярности (табл.1). В эксперименте исследовали системы, предложенные в литературе [1], а также изучены новые хрома-тографические системы. В описанных в табл. 1 элюентах, осуществляли хроматографирование стандартного раствора токоферола ацетата (НД 42-7843-97) [2].
|
Таблица 1
Хроматографические параметры витамина Е в различных элюирующих системах
|
| № п/п |
Элюент |
Rf |
Н, мм |
N |
К |
Р |
| 1 |
Хлороформ-этанол (3 : 1) |
0,97±0,01 |
0,37 |
192 |
0,03 |
4,15 |
| 2 |
Хлороформ-этанол (2 : 1) |
0,95±0,01 |
0,23 |
330 |
0,05 |
4,16 |
| 3 |
Хлороформ-этанол (1 : 1) |
0,94±0,01 |
0,32 |
256 |
0,06 |
4,2 |
| 4 |
Хлороформ |
0,59±0,02 |
0,55 |
156 |
0,69 |
4,1 |
| 5 |
Бензол-этилацетат (8 : 2) |
0,85±0,02 |
0,98 |
80 |
0,18 |
3,26 |
| 6 |
Бензол-петролейный эфир (1:1) |
0,80±0,02 |
0,78 |
106 |
0,25 |
3,36 |
| 7 |
Гексан-этилацетат (37 : 3) |
0,29±0,02 |
0,34 |
253 |
2,45 |
0,48 |
| 8 |
Октан-диэтиловый-эфир (7 : 1) |
0,30±0,02 |
0,59 |
140 |
2,33 |
0,44 |
На хроматограммах для каждой элюирующей системы были рассчитаны такие хроматографиче-ские параметры [3], как величина (Rf); коэффициент распределения (К); высота, эквивалентная теоретической тарелке (H); число теоретических тарелок (N). Данные табл. 1 показывают, что наибольшая эффективность хроматографического процесса, согласно значениям величин N и Н, наблюдалась в системах № 2, 3 и 7, а наименьшая - в системах № 5 и 6. Параметры N и Н взаимосвязаны между собой нелинейной обратно пропорциональной зависимостью. Оптимальные величины Rf, согласно автору [3], достигнуты в системах № 4, 7 и 8.
Несмотря на то, что в системах № 2, 3 и 7 величины N имеют большее значение, чем в системах № 4 и 8, качество зон на хроматограммах значительно хуже, и, следовательно, затруднена их обработка. Хроматографирование можно проводить в системах № 4, 7 и 8. Лучшее качество хроматографиче-ских зон было достигнуто в однокомпонентной системе № 4. В данной системе зоны витамина Е имели округлую форму, что свидетельствует о линейной изотерме сорбции [3].
Таким образом, по совокупности полученных результатов были выбраны и теоретически обоснованы оптимальные условия хроматографирования витамина Е в тонком слое сорбента: сорбент - си-ликагелевые пластинки марки «Sorbfil» 10х10 см с полимерной подложкой; элюент - хлороформ; проявитель - конц. азотная кислота; объем пробы - 10 мкл спиртового раствора с содержанием а-токоферола ацетата 3 мг/мл; время насыщения камеры парами элюента - 20 мин; время элюирования - 25 мин; время выдерживания пластинки в термостате при t ° > 80 °С - 5 - 7 мин; чувствительность методики 3-10-6 г.
Список литературы:
1. Надиров Н.К. Токоферолы и их использование в медицине и сельском хозяйстве / Н.К. Надиров // М.: Наука, 1991. - 336с.
2. «Витамин Е в капсулах». НД 42-7843-97.
3. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии/ Ф. Гейсс // М.: Мир, 1999. - 405 с.
4. Государственная фармакопея СССР.- М.: Медицина.-10-е изд., 1968.-с. 707.
|
