|
Воронежский государственный университет, Воронежский областной клинический консультативно-диагностический центр
Ревматоидный артрит – хроническое системное аутоиммунное воспалительное заболевание, при котором происходит преимущественно поражение периферических суставов с развитием в них деструктивных изменений. Почти половина больных с этой патологией становятся инвалидами в течение первых нескольких лет заболевания. Кроме того, при ревматоидном артрите снижается продолжительность жизни из-за сопутствующих заболеваний, развитие которых связано с прогрессированием иммуновоспалительного процесса. Одним из первичных звеньев барьерных механизмов системы иммуногенеза являются гранулоцито-макрофагальные клетки (ГМК). При контакте ГМК цельной крови с внешним сигналом активируется процесс генерации активных форм кислорода (АФК), отражающий уровень кислородного метаболизма этих клеток и связанный с функционированием ведущих механизмов иммунитета. Образующиеся при этом АФК оказывают патогенное воздействие на биомолекулы клетки непосредственно, либо инициируют пероксидное окисление липидов, что приводит к деградации коллагена, гиалуроновой кислоты, повреждению соединительной ткани [1]. Противостоит патогенному действию АФК антиоксидантная система организма. Одним из основных антиоксидантных ферментов является каталаза, присутствующая практически во всех тканях организма. Данный фермент катализирует реакцию расщепления пероксида водорода до молекулярного кислорода и воды [2]. Целью данной работы являлось исследование активности каталазы в тканях крыс при экспериментальном ревматоидном артрите.
В настоящее время одной из адекватных моделей ревматоидного артрита является адъювантный артрит (АА). В качестве объекта исследования использовались белые лабораторные крысы-самцы массой 150-200 г. Животные были разделены на 2 группы (опытную и контрольную), содержащиеся на стандартном режиме вивария. У опытной группы животных АА индуцировали путём подкожного введения в подушечку лапки полного адъюванта Фрейнда – комплекса соединений, вызывающего развитие данной патологии, в объёме 100 мкл [3].
Исходя из литературных данных, вторичная воспалительная реакция у исследуемых животных должна была проявиться приблизительно на 15 день после индукции АА. Однако внешние клинические проявления развития патологии были более явными в течение первой недели эксперимента. Так, с 3 по 6 день исследования разница толщины воспалённой и нормальной лапок крыс, измеренная у щиколотки, составляла в среднем 1,4 0,2 мм. Разница толщины лапок крыс, измеренная на 15 день после индукции патологии, составляла в среднем 0,7 0,2 мм. В связи с этим, определение активности каталазы проводилось в 2 периода: на 3, 5 и 6, и на 13, 15 и 17 дни после индукции патологии, материал для исследования забирался у наркотизированных животных. Сыворотку крови получали с помощью центрифугирования в течение 10 мин при 3000 g. Для получения гомогената навески тканей растирали в ступке с охлажденной средой выделения (50 ммоль/л трис-HCl буфер, рН 7,5, содержащий 1 ммоль/л ЭДТА, 1% β-меркаптоэтанола) в соотношении 1:3 (сердце), 1:4 (печень) и 1:5 (мышцы), затем центрифугировали при 5000 g в течение 10 мин. Активность каталазы определяли спектрофотометрически при длине волны 410 нм. За ферментативную единицу (Е) принимали количество фермента, необходимого для превращения 1 мкмоль субстрата в 1 мин. при 25о С [2]. Показатели опытной группы животных сравнивались с показателями контрольной группы. Данные обрабатывали с использованием t–критерия Стьюдента, различия считали достоверными при p 0,05.
Результаты работы показали, что активность каталазы была выше в течение первого периода исследования и достигала максимума на 6 день после индукции АА. Так, активность фермента, выраженная в Е/мл и Е/мг белка, в сыворотке крови животных увеличивалась в 2,0 и 2,8 раза по сравнению с показателями контрольной группы животных. Активность фермента, выраженная в Е/г сырой массы и Е/мг белка возрастала в сердце крыс в 2,4 и 1,8 раза, в печени – в 1,5 и 2,6 раза соответственно по сравнению с контролем. В мышцах крыс активность каталазы, выраженная в Е/г сырой массы и в Е/мг белка на 5 день была выше в 2,5 и 4,6 раза, на 6 день – в 3,0 и 2,3 раза по сравнению с контрольной группой животных. В течение второго периода исследования максимальная активность каталазы, выраженная в Е/мл и в Е/мг белка, наблюдалась на 15 день и увеличивалась в сыворотке крови в 2,1 и 2,2 раза. В мышцах активность фермента, выраженная в Е/г сырой массы и Е/мг белка возрастала в 3,6 и 2,4 раза по сравнению с контролем. В сердце и печени животных в течение второго периода эксперимента наивысшая активность каталазы выявлялась на 13 день. Так, активность фермента, выраженная в Е/г сырой массы и в Е/мг белка, была выше в сердце в 1,6 и 1,1 раза, в печени – в 1,8 и 2,0 раза соответственно по сравнению с контрольной группой животных. Полученные данные свидетельствуют о значительном увеличении активности каталазы в тканях животных при экспериментальном ревматоидном артрите, что, вероятно, обусловлено генерированием большого количества АФК и интенсификацией свободнорадикального окисления.
Список литературы:
1. Клиническая ревматология: Руководство для врачей / В.И. Мазуров [и др.]. – Санкт-Петербург: Фолиант, 2005. – 487 с.
2. Методы оценки оксидативного статуса: учебно-методическое пособие для вузов / Т.И. Рахманова, Л.В. Матасова, А.В. Семенихина, О.А. Сафонова, А.В. Макеева, Т.Н. Попова. - Воронеж: Изд-во ВГУ, 2009. - 64 с.
3. Therapeutic effects of TACI-Ig on rat with adjuvant arthritis / D. Wang [et al.] // Clinical and Experimental Immunology – 2010. – № 163. – Р. 225-234.
|
