|
Запорожский национальный университет
(Запорожье)
Эта статья опубликована в сборнике научных статей с материалами XII Телеконференции с международным участием "Актуальные проблемы современной науки", Томск, 21-26 октября, 2013 год
Во второй половине 20-го столетия была обнаружена природная
уникальность и информативность феномена спонтанного розеткообразования
эритроцитов барана с лимфоцитами человека. Принцип методики используется и на
современном этапе экспериментальной и клинической лабораторной иммунологии – в фенотипировании лимфоцитов с помощью эритроцитарного диагностикума,
результаты которого имеют высокий уровень корреляции с данными других
современных высокоинформативных методов фенотипирования (непрямой
флуоресценции, проточной цитофлуорометрии).
Однако широко используемый способ
определения содержания отдельной популяции/субпопуляции лимфоцитов в организме
человека с помощью эритроцитарного диагностикума «Анти-Сd» также не лишен определенных методических недостатков. Так,
более качественному выявлению CD-структур лимфоцитов препятствует отсутствие
оптимальной культуральной среды для полноценного рецептор-лигандного
взаимодействия между клетками, изъятыми из организма человека (проведение
методики проводится на солевых растворах). Кроме того, фиксация осадка клеток
0,12% раствором глютарового альдегида с перемешиванием клеток приводит к
разрушению части «розеток», особенно высокоавидных.
Предлагается усовершенствованная
модификация постановки реакции розеткообразования с эритроцитарным
диагностикумом «Анти-Сd», которая
от общеизвестного способа отличается тем, что: 1) постановка реакции розеткообразования
проводится на культуральной смеси (среда 199 и эмбриональная телячья
сыворотка в объемном соотношении 4 : 1 с pH 7,2), которую
использовали для подготовки эритроцитарного диагностикума «Анти-Сd» и приготовления суспензии
лимфоцитов); 2) после смешивания лимфоцитов с эритроцитарным диагностикумом для
приближения клеток проводится центрифугирование полученной смеси; 3) фиксация
осадка клеток проводится не 0,12%, а 0,6% раствором глютарового альдегида
с pH 7,2, который также готовили на культуральной смеси (уровень рН
обеспечивали добавлением насыщенного раствора пищевой соды).
Иммунологическое обследование проводили у 26 женщин в
возрасте 48-55 лет. Для этого осуществляли забор 10 мл венозной крови,
стабилизированной гепарином (0,02 мг/мл). На фиколл-верографиновом
градиенте (ρ=1,078 г/см3) из нее выделяли лимфоциты, которые
использовали для проведения сравнительных исследований по фенотипированию
лимфоцитов согласно предложенному способу и розеточному методу с эритроцитарным
диагностикумом «Анти-Сd» (Таблица 1).
Таблица 1 - Определение содержания отдельной
популяции/субпопуляции лимфоцитов в периферической крови человека
|
Протестированная популяция/
субпопуляция лимфоцитов
|
Способ определения, %
|
|
Розеточный с эритроцитарным диагностикумом «Анти-Сd»
|
Предложенный способ
|
|
Сd3+
|
50,0±1,2
|
64,0±1,7*
|
|
Сd4+
|
34,0±2,1
|
43,5±1,8*
|
|
Сd8+
|
16,0±1,2
|
22,5±2,0*
|
|
Сd16+
|
14,8±1,5
|
25,1±1,0*
|
|
Сd22+
|
12,5±1,1
|
19,9±1,3*
|
Примечание. * – показатели статистически значимо
отличаются (р≤0,05).
За данными таблицы 1 выявляемость Сd-структур при фенотипировании
лимфоцитов согласно предложенному способу значительно выше стандартной
методики. Достоверные отличия в иммунологической панели отмечены для всех
протестированных популяций/субпопуляций лимфоцитов.
Таким образом, предложенный
способ определения содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов крови в
организме человека позволяет оперативно и достоверно, с большей точностью
проводить иммунологический анализ состояния клеточного звена иммунитета
человека.
|
