НИИ медицинской генетики, г. Томск
Лаборатория цитогенетики
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,4 мб)
Рак молочной железы (РМЖ) занимает первое место среди всех онкологических заболеваний у женщин. Развитие новых методов ранней диагностики РМЖ является весьма актуальной и важной задачей. В последние десятилетия было установлено, что в многостадийном процессе образования опухолей нарушение функций клеточных генов может происходить не только в результате генетических событий (точечные мутации, делеции, амплификация), но и в результате эпигенетических изменений, в том числе локального гиперметилирования ДНК, а также были разработаны методы идентификации гиперметилированных районов ДНК, основанные на оценке дифференциального статуса метилирования CpG-островков в нормальных и опухолевых клетках. Число генов, для которых обнаружен эпигенетический механизм инактивации экспрессии в опухолях, постоянно растет, что свидетельствует о широком распространении этого механизма в процессе канцерогенеза. Одним из таких генов-супрессоров опухолевого роста является ген Rb1, локализованный в проксимальном отделе длинного плеча хромосомы 13q14.1. Ген Rb1 кодирует мРНК , экспрессирующуюся в норме во всех клетках организма. Продукт гена Rb1 – ядерный фосфопротеин, является негативным регулятором клеточной пролиферации. В нормальных клетках pRb1 экспрессируется на протяжении клеточного цикла, но белок в различной степени подвергается посттрансляционной модификации, которая регулируется путём фосфорилирования и дефосфорилирования с помощью циклин- зависимых РБ-киназ и фосфотаз. Ген Rb1 ассоциирован с ретинобластомой и мутации данного гена приводят в первую очередь к развитию данной опухоли. Ретинобластома – злокачественная опухоль сетчатки глаза, составляющая 0,6-0,8% от числа всех больных с онкозаболеваниями. При данном заболевании выявляется микроделеция 13 хромосомы, сегмента 13q14 . Однако, кроме делеции встречаются мозаичные формы и транслокационные варианты [2].
Целью настоящей работы было изучение характера метилирования промоторного региона онкосупрессорного гена Rb1 в образцах опухолей молочной железы.
В качестве объекта исследовались 43 опухоли РМЖ, 8 образцов с фиброзно-кистозной болезнью и 8 образцов из метастазированного лимфатического узла у жительниц Томска а также 11 образцов рака молочной железы, полученные у больных из Якутии. Анализ статуса метилирования проводили с помощью метил-специфицеской ПЦР с использованием праймеров, фланкирующих CpG-островки в промоторном регионе гена. Бисульфитную модификацию ДНК проводили в течение 1 часа при 95 ?С. Фрагменты ДНК фракционировали с помощью гель-электрофореза в 2% агарозном геле и визуализировали в проходящем ультрафиолете.
В результате анализа статуса метилирования гена Rb1 были получены следующие результаты: в 43 образцах опухолях РМЖ, в 8 образцах с фиброзно-кистозной болезнью и образцах из метастазированного ЛУ, полученных от больных из Томска, аберрантного метилирования гена Rb1 не было обнаружено. В образцах опухолей РМЖ от больных из Якутии статус метилирования гена Rb1 составил 18% (2 из 11 исследуемых образцов, причем в обоих случаях имелись как метилированный, так и неметилированный аллели), в остальных 82% случаях (9 образцов опухолей из 11) ген Rb1 оказался неметилированным.
Таким образом, в нашем исследовании пока не удалось доказать тот факт, что аберрантное метилирование гена онкосупрессора Rb1 вносит существенный вклад в развитие РМЖ, что может быть связано с недостаточным количеством проанализированного материала. Однако это предварительные результаты, и мы не можем четко ответить на этот вопрос. Исходя из данных литературы, можно отметить, что ген Rb1 играет роль в развитии различных опухолей, в частности, метилирование гена Rb1 отмечено в 25% образцов глиобластомы, а с помощью иммуногистохимических методов установлено снижение его экспрессии [3]. Негативное влияние метилирования на экспрессию Rb1 показано и при раке легкого. Землякова В.В. с сотрудниками (2003) выявили метилирование гена Rb1 в 18 из 105 образцов РМЖ, что составляет 17% [1].
Список литературы:
1. Землякова, В. В. Аномальное метилирование некоторых генов-супрессоров при спорадическом раке молочной железы / В. В. Землякова, А. И. Жевлова, В. В. Стрельников, Л. Н. Любченко, Я. В. Вишневская, В. А. Третьякова, Д. В. Залетаев, М. В. Немцова // Молекулярная биология. – 2003. – Т.37, №4. – С. 696-703.
2. Buchkovich, K. The retinoblastoma protein is phosphorylated during specific phases of the cell cycle / K. Buchkovich, L. A. Duffy, E. Harlow // Cell. – 1989. – V. 58. – P. 1097–1105.
3. Nakamura, M. Promoter hypermethylation of the RB1 gene in glioblastomas / M. Nakamura, Y. Yonekawa // Kleihues et al Laboratory Investigation. – 2001. – V.81. – P. 77–82.
