|
ГОУ ВПО "Пермская государственная медицинская академия МЗ РФ " (г.Пермь)
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам пятого конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.- Томск, СибГМУ.- 2004.- 413 с.
Скачать сборник целиком
Современная ситуация характеризуется широким распространением микозов и, как следствие, возрастающим интересом к этой проблеме, в частности, кандидозу слизистых оболочек. У врачей нередко возникают сложности при оценке результатов обследования пациентов, целесообразности назначения лекарственной терапии и выборе схем лечения. Это связанно с тем, что грибы рода Candida амбивалентны. Их трансформация из безобидных комменсалов в агрессивные формы возбудителей заболеваний, происходит в результате нарушения барьерных механизмов и снижения защитных сил организма, что обуславливается разнообразными экзогенными и эндогенными факторами [2]. При кандидозном вульвовагините существенное значение имеет рН влагалищного секрета. Уровень рН может влиять как на состояние микрофлоры влагалища, так и на фармакологические свойства применяемых препаратов.
Цель исследования: в условиях эксперимента оценить влияние кислотности среды (рН 3,5-7,0) на рост Candida и антифунгальное действие препарата "Микосист" с использованием морфометрического анализа.
Материалы и методы. В серии экспериментов прослежено действие "Микосиста" на культуры Candida albicans, выделенные от больных с кандидозным вульвовагинитом, в зависимости от pH среды. При этом культуры Candida выращивали на жидкой и плотной среде Сабуро, а морфометрические характеристики клеток и колоний изучали с помощью компьютерной микроскопии с использованием установки OLYMPUS (производство Япония) при инструментальных увеличениях 100х1,36х10 и 4х0,85х10 соответственно. Статистический анализ полученных показателей проведен с помощью программы Image-Pro (версия Demo).
Результаты. Штаммы грибов культивировали на жидкой среде Сабуро откалиброванной в диапазоне pH от 3,5 до 7,0 в течении 30 и 60 минут, с добавлением "Микосиста" и без него, при t = 37еС с последующим высевом на плотную стандартную среду Сабуро.
Рис. 1. Влияние рН на рост Candida и фунгицидное действие препарата "Микосист".
Как следует из представленных данных (рис.1, контроль), количество и размеры колоний Candida albicans варьировали под воздействием pH среды и препарата "Микосист". В контроле (без препарата) при значениях рН=3,5 в течении 30- минутной экспозиции рост колоний составил 82,5±3,53; 60-минутной - 102,5±3,53. При pH 4,0 число колоний было минимальным: 30-минутная экспозиция - 77,5±3,53; 60-минутная - 32,5±3,53. В диапазоне рН 4,5-5,5 рост колоний колебался в пределах (30' - 77,5±3,53-105±7,07 ; 60' - 95±7,07-102,5±3,53) и достигал максимума при pH 6,0 (30' - 165,0±7,07; 60' - 145,0±7,07). Сдвиг рН в щелочную сторону существенно задерживал рост Candida albicans: рН 6,5 - 30' - 97,5±3,53; 60' - 132,5±3,53; рН 7,0 - 30' - 105±7,07; 60' - 125±7,07. Такое распределение показателей согласуется с данными литературы [1], в соответствии с которыми оптимальным для роста и развития Candida является рН=5,8-6,5. В колебании численности КОЕ Candida под влиянием "Микосиста" (рис.1, опыт) прослеживали аналогичные тенденции, а некоторое ее снижение относительно контроля не было статистически достоверным. Время экспозиции в большинстве случаев не влияло на количество колониеобразующих едениц и в контроле и в опыте. Однако при рН 4,0, когда регистрировался минимальный рост колоний, продление экспозиции на 30 минут приводило к снижению количества колоний на 57%(контроль) и 59% (опыт). Т.о при визуальном количественном учете выросших колоний создается впечатление, что на рост Candida влияет только рН среды, а ингибирующее действие препарата практически не выражено. Изучение колоний, выросших в условиях опыта и контроля при pH 4,0(min), pH 6,0(max), а также приготовленных из них мазков-препаратов, окрашенных по Граму, с использованием морфометрической установки и статистической обработки полученных данных, позволило установить следующее: при рН = 4,0 диаметр колоний определен в пределах 1,48 ± 0,295 мм (контроль) и 0,405 ± 0,155мм (опыт), соответственно размеры клеток составили 2,849 ± 0,877мкм-длина, 2,231 ± 0,641мкм-ширина (контроль) и 3,113 ± 0,914мкм-длина, 2,668 ± 0,737мкм-ширина (опыт), при рН = 6,0 диаметр колоний - 1,32 ± 0,229мм (контроль) и 0,33 ± 0,095мм (опыт), размеры клеток - 2,659 ± 0,855мкм-длина, 2,118 ± 0,622мкм-ширина (контроль) и 3,113 ± 0,956мкм-длина, 2,685 ± 0,769мкм-ширина (опыт). Более того, клетки, образующие колонии в опыте крупнее, как правило, сгруппированы и образуют между собой тяжи, принимая вид "кристаллической решетки". Наиболее крупные клетки окрашены интенсивнее других. В контрольных культурах клетки меньше по размеру, равномерно окрашены, располагаются мозаично, не образуя групп и связей.
Таким образом при инструментальной обработке результатов эксперимента прослежены достоверные различия, отражающие фунгицидное действия "Микосиста" и влияние рН среды на грибы рода Candida.
Заключение. На основании экспериментальных наблюдений показана зависимость роста Candida от рН среды, кроме того установлено, что кислотность среды в определенной степени, определяет антифунгальное действие "Микосиста". Использование морфометрии способствует объективизации оценки получаемых результатов.
Литература
1. Кубась В.Г., Данилова О.П. и др. Кандидозная инфекция.- СПб.: 1996. - 46с.
2. Родионов А.Н. Грибковые заболевания кожи. Руководство для врачей. - СПб.: Питер Паблишинг, 1998. - 288с
|
