В настоящей работе изучалось влияние гипоосмотической среды на механическое напряжение (МН) сосудистых гладких мышц (ГМ), а так же оценивался вклад Na+/K+/2Cl- - котранспорта (NKCC1) и хлорных токов, как возможных механизмов, в регуляции сократительной активности ГМ в гипоосмотическом растворе.
Исследования проводились на изолированных деэндотелизированных кольцевых сегментах грудного отдела аорты крысы. Механическое напряжение ГМ измеряли методом механографии [1], в условиях близким к изометрическим. Для изучения роли NKCC1 использовали его специфический блокатор - буметанид [4], для изучения роли хлорных токов - нифлумовую кислоту [2].
При аппликации гипоосмотического раствора (216,4 мОсм) развивалось неподдерживаемое (в течение 20 - 25 минут) повышение МН сосудистых сегментов, величина которого составила 96,6% ± 22,6% (n = 6) от контрольной изоосмотической гиперкалиевой (KCl, 30 мМ) контрактуры. Неподдерживаемый характер сокращения ГМ аорты крысы в условиях гипоосмотического гипонатриевого гипохлорного раствора свидетельствует о транзиторном повышении внутриклеточной концентрации ионов кальция в ГМК в этих условиях. Резкое увеличение химической компоненты электрохимического потенциала в ГГГР для ионов хлора на первом этапе приводит к возрастанию хлорного тока, деполяризации мембраны ГМК и сокращению. Последующее ингибирование NKCC1 в гипотоничном растворе [2, 3, 4], и как следствие уменьшение внутриклеточной концентрации Cl-, ведет к снижению электрохимического потенциала для этих ионов, уменьшению выходящего потока ионов хлора (входящего хлорного тока), реполяризации и расслаблению.
Предобработка сосудистых сегментов буметанидом, в концентрации 10, 50 и 100 мкМ приводила к снижению амплитуды транзиторного сокращения до 42,6% ± 0,5% (n = 5, p < 0,05), 21% + 1,4% (n=5 p < 0,05) и 9,8% ± 14,6% (n = 5, p < 0,05). Угнетение сокращения ГМ аорты крысы при действии буметанида в гипоосмотическом растворе указывает на участие NKCC1 в генерации сокращения в этих условиях.
Предобработка сосудистых сегментов нифлумовой кислотой в концентрациях 1, 10 и 100 мкМ снижала амплитуду транзиторного сокращения ГМ аорты крысы в гипоосмотическом растворе до 8,6% + 4,8% (n = 5, р<0,05), 12,6% + 16,1 (n=6, р<0,05), и -5,7% + 0,9% (n = 5, р<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о значительном вкладе хлорных токов в развитие преходящего повышения механического напряжения сосудистых сегментов в гипоосмотическом гипонатриевом гипохлорном растворе.
Таким образом, NKCC1, обеспечивая неравновесное распределение ионов Cl- в ГМК [2, 3, 4], является необходимым звеном в обеспечении сократительных ответов гладких мышц при действии гипоосмотического раствора. Наиболее вероятным механизмом, обеспечивающим влияние NKCC1 на МН ГМ являются хлорные токи.