Апоптоз является физиологическим механизмом устранения избыточных и функционально неполноценных клеток. Излишняя активация или угнетение апоптотической программы являются ведущими патогенетическими звеньями ряда распространенных заболеваний человека (воспаление, опухолевый рост, нейродегенеративные процессы) [2]. Не менее важная роль, помимо нарушений реализации апоптоза, в патогенезе данных болезней принадлежит развитию окислительного стресса. Последний характеризуется активацией развитию окислительного стресса. Последний характеризуется активацией эндогенных механизмов генерации активных форм кислорода (АФК), истощением системы антиоксидант-ной защиты, сдвигом баланса редокс-метаболизма в сторону прооксидантов. АФК вызывают модификацию биомолекул, активируют ферменты и редокс-чувствительные сигнальные пути, действуя в высоких концентрациях, АФК могут привести к инициации апоптотической гибели клеток [1, 3].

Данное исследование было направлено на выявление молекулярных механизмов реализации апоптотической программы в условиях окислительного стресса in vitro и при остром воспалении (острая пневмония, острый аппендицит).
Материал и методы исследования. Работа основана на результатах исследования 15 здоровых доноров, 10 пациентов с диагнозом острой пневмонии и 10 больных с острым аппендицитом. Материалом для исследования служила периферическая кровь, взятая из локтевой вены. Для индукции окислительного стресса в культуру мононуклеаров, полученных у здоровых доноров, добавляли перекись водорода в конечной концентрации 1 мМ. Мононук-леарные лейкоциты инкубировали в течение 18 ч. при температуре 37° С.

Уровень внутриклеточной наработки АФК, регистрацию апоптоза мононуклеарных лейкоцитов, содержание клеток со сниженным трансмембранным митохондриальным потенциалом и клеток, презентирующих на своей поверхности ТОТ1-рецептор анализировали на проточном цитометре Epics XL («Beckman Coulter»).

Методом вестерн блоттинга определяли содержание транскрипционного фактора p53 с использованием специфических антител к данному белку («Biosource», США). Полученные данные обрабатывали с помощью прикладного пакета STATISTIKA 6.0.

Результаты исследования. Для оценки влияния АФК на реализацию программы апопто-за мононуклеары, полученные у здоровых доноров, инкубировали с миллимолярной перекисью водорода.
Отсутствие различий по уровню внутриклеточной продукции АФК, количеству TNFR1 -положительных и апоптозных клеток, содержанию мононкуклеаров со сниженным значением митохондриального трансмембранного потенциала в культурах мононуклеарных лейкоцитов, выделенных из периферической крови больных с острой пневмонией и больных с острым аппендицитом, позволило объединить данных пациентов в одну группу.

Содержание внутриклеточных АФК после добавления перекиси водорода достоверно превышало аналогичный параметр в контроле, и было сопоставимо с таковым в клетках, выделенных из периферической крови больных с острым воспалением.
Количество клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом в случае индукции окислительного стресса 1 мМ перекисью водорода in vitro не отличалось от такового при остром воспалении, при этом данные показатели достоверно превышали контрольное значение.

Относительное количество апоптозных клеток в культурах мононуклеаров, выделенных из периферической крови больных с острым воспалением, достоверно превышало контрольное значение, не отличаясь при этом от аналогичного параметра в клетках с индукцией окислительного стресса.
Содержание TNFR1-несущих клеток в культурах мононуклеаров, полученных у больных с острым воспалением, соответствовало таковому в случае индукции окислительного стресса in vitro при воздействии перекисью и превышало контрольное значение.
При анализе уровня белка р53 в мононуклеарах, полученных у больных с острым воспалением, и в клетках здоровых доноров после инкубации с перекисью, не было выявлено изменений исследуемого параметра по сравнению с контролем.

Заключение: Таким образом, увеличение внутриклеточного уровня активных форм кислорода in vitro и при остром воспалении (острый аппендицит, острая пневмония) сопровождается активацией апоптоза с вовлечением различных (митохондриального и рецепторного) путей.