Активные формы кислорода (АФК), являясь необходимым атрибутом жизнедеятельности всех аэробных организмов, обеспечивают адаптивную реакцию клеток на внешние раздражители, однако четкая грань перехода от физиологической функции данных молекул к патологической отсутствует. Увеличение продукции АФК на фоне снижения резервов антиокси-дантной защиты приводит к развитию окислительного стресса, который сопровождает различные патологические процессы. Высокий уровень АФК при дисбалансе окислительного метаболизма активирует редокс-чувствительные сигнальные пути, что может привести к запуску летальной программы клеток [1, 2].

Одной из основных мишеней АФК считаются митохондрии, которым также принадлежит ключевая роль в реализации внутреннего (митохондриального) пути клеточной гибели. Воздействуя на редокс - чувствительные факторы транскрипции (p53, NF-kB), АФК изменяют экспрессию ряда генов, в том числе белков-регуляторов апоптоза семейства Bcl-2. Последние способны формировать поры в митохондриальной мембране, высвобождая ряд факторов (цитохром с, Smac/DIABLO, AIF, эндонуклеаза G), приводящих к активации апоптозспеци-фических протеаз и запуску программированной гибели клетки [3].

Целью данного исследования явилась оценка роли белков семейства Bcl-2 в регуляции апоптоза в условиях окислительного стресса in vitro и при острой пневмонии.

Материал и методы исследования. Объектом данного исследования явились 15 здоровых доноров и 11 пациентов с подтвержденным диагнозом острой пневмонии. Материалом для исследования служила периферическая кровь, взятая из локтевой вены. Экспериментальная модель окислительного стресса представляла собой инкубацию мононуклеаров здоровых доноров с перекисью водорода в конечной концентрации 1 мМ в течение 18 ч. при температуре 37° С.
Методом проточной лазерной цитометрии оценивали уровень внутриклеточной наработки АФК, количество апоптозных клеток, содержание мононуклеаров со сниженным трансмембранным митохондриальным потенциалом в культурах мононуклеарных лейкоцитов, полученных у здоровых доноров и больных с острым воспалением легких.

Для определения содержания ключевых белков-регуляторов апоптоза (Bcl-2, Bcl-XL, Bax) был использован иммуноблотинг со специфическими антителами к исследуемым белкам фирмы «Biosource», США.

Полученные данные обрабатывали с помощью прикладного пакета STATISTIKA 6.0.
Результаты исследования. Добавление Н2О2 в культуральную среду приводило к достоверному увеличению внутриклеточного уровня АФК в мононуклеарах, выделенных из периферической крови здоровых доноров, которое было сопоставимо с таковым в клетках, полученных у больных с острой пневмонией.

Различия по числу клеток со сниженным митохондриальным трансмембранным потенциалом в случае индукции окислительного стресса in vitro и при острой пневмонии не наблюдались, при этом данные показатели достоверно отличались от контрольного значения.

Количество аннексин-положительных клеток при индукции окислительного стресса перекисью водорода значительно превышало таковое в контроле, не отличаясь при этом от аналогичного параметра в культуре мононуклеаров, выделенных из периферической крови пациентов с пневмонией.
Проведенное нами исследование содержания белков семейства В^2 в мононуклеарах, полученных у здоровых доноров, (при добавлении Н2О2) и в клетках, полученных у больных с острой пневмонией, выявило увеличение уровня проапоптотического белка Вах по сравнению с контролем. В то же время наблюдалось отсутствие различий по содержанию Bcl-XL и Bcl-2 во всех исследуемых культурах мононуклеаров (контроль, экспериментальная модель окислительного стресса и у пациентов с острым воспалением легких). Таким образом, в условиях дисбаланса окислительного метаболизма (в мононуклеарах, полученных у пациентов с острой пневмонией и при окислительном стрессе in vitro) наблюдается нарастание уровня проапотогенного белка Вах на фоне неизмененного содержания аниапоптотических белков Bcl-XL и Bcl-2.

Заключение. Повышение уровня внутриклеточной продукции АФК сопровождается увеличением числа аннексин - положительных клеток и падением уровня митохондриального мембранного потенциала. Наблюдаемый при этом дисбаланс белков семейства Bcl-2 обуславливается возможной активацией редокс-чувствительных элементов сигнальной транс-дукции (МАР киназ и факторов транскрипции) в условиях окислительного стресса.