Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Цель гистохимии как раздела гистологии и цитологии – микроскопическая локализация химических соединений в клетке и тканях при сохранении их структуры.
Результат гистохимического анализа в равной мере зависит от качества проведенной гистохимической реакции и подготовки материала. Процесс подготовки включает взятие образца ткани, фиксацию, промывание, обезвоживание, заливку в парафин или синтетические смолы. Для последующего гистохимического анализа наиболее важен выбор метода фиксации.
Целью фиксации биологического материала для гистохимии является перевод живого вещества из лабильного состояния в стабильное, т. е. прекращение аутолиза, и стабилизация веществ и структур клетки. Для достижения этой цели возможны три подхода: высушивание, замораживание и химическая фиксация.
Наиболее часто как в гистологической, так и в гистохимической практике используют метод химической фиксации. В химической фиксации для гистохимических целей используют различные фиксаторы: альдегиды, хромовую кислоту, соли ртути, ацетон, спирты, кислоты и др. [1].
Целью данной работы было выяснить, какой из наиболее широко используемых в гистохимии фиксаторов обеспечивает наилучшие результаты гистохимической реакции.
В качестве объекта исследования использовались препараты тонкого кишечника крысы. Вырезанные кусочки фиксировались в трех различных фиксаторах: 10 % забуференном формалине, 2,5 % глутаровом альдегиде и 4 % параформе. В дальнейшем обработка материала производилась по стандартной методике: блоки промывались проточной водой, обезвоживались в спиртах возрастающей концентрации и заливались в парафин. Всего было изготовлено 17 парафиновых блоков: 6 фиксированных в 10 % забуференном формалине, 5 фиксированных в 2,5 % глутаровом альдегиде, 6 фиксированных в 4 % параформе.
Срезы окрашивались на предмет выявления клеток диффузной эндокринной системы (APUD-системы). Окрашивание производилось свинцовым гематоксилином по методу Solcia и гранатовым прочным GBC [2].
В препаратах, фиксированных забуференным 10 % формалином, ядра были четко окрашены гематоксилином в синий цвет, апудоцитов обнаружено не было. В препаратах, фиксированных 2,5 % глутаровым альдегидом, наряду с окрашенными гематоксилином ядрами присутствовали группы темных клеток, окрашенных в сине-черный цвет. Клетки локализовались в подслизистом слое кишки, что нетипично для апудоцитов, а также овальная форма, гомогенное окрашивание и групповое расположение позволили предположить, что данные клетки, скорее всего, являются лаброцитами. В препаратах фиксированных 4 % параформом на фоне окрашенных гематоксилином ядер в слизистом слое тонкого кишечника обнаруживались единичные черно-синие клетки характерной для апудоцитов треугольной формы со смещенным на периферию ядром.
Так как исследуемые ткани брались у одних и тех же лабораторных животных, то можно предположить, что параформ, является наиболее приемлемым фиксатором при проведении гистохимической реакции для выявления апудоцитов методом Solcia.
В связи с тем, что в данном исследовании параформ оказался лучшим фиксатором, представляем сведения об этом веществе.
Параформ – продукт полимеризации муравьиного альдегида (формальдегида),
представляющий собой белый аморфный порошок, с резким запахом муравьиного альдегида. Общая формула НО(-СН2О-)nН, где n=8–100. Чистый параформ содержит 93–98 % формальдегида, а также химически связанную воду. При нагревании и хранении деполимеризуется до муравьиного альдегида. Получают параформ из концентрированного раствора формальдегида. Параформ токсичен, что обусловлено выделением свободного формальдегида. Параформ может получаться как побочный продукт при хранении формалина, он сильно нарушает свойства последнего как фиксатора, отрицательно влияя на качество окраски в гистологических методиках [3].
Параформ плавится в интервале температур от 130 до 170°С. Состав параформа непостоянен и зависит от условий его получения. Один из широко распространенных полимеров представляет собой триоксиметилен (СН2О)3. При действии воды параформ по мере деполимеризации растворяется и образует гидратную форму мономера СН2(ОН)2. Чем выше степень полимеризации, тем больше подавлена химическая активность параформа, который реагирует, как муравьиный альдегид, со скоростью его деполимеризации.
Итак, из трёх исследованных в данной работе фиксаторов наиболее удачным для последующего выявления апудоцитов методом Solcia, является параформ. В препаратах, полученных из фиксированного в параформе материала, искомые клетки выявились наиболее чётко. Среди рассмотренных фиксаторов параформ зарекомендовал себя наилучшим образом, так как препараты, фиксированные в нём, оказались информативнее и представительнее препаратов прошедших фиксацию в глутаровом альдегиде или формалине.

Список литературы:
1. Микроскопическая техника : Руководство / под ред. Д. С. Саркисова, Ю. Л. Перова. – М. : Медицина, 1996. – 544 с.
2. Solcia, Е. Hematoxylin as a stain endocrin cells significance of staining and compression with other selective methods / E. Solcia, C. Capella and G. Vanallo. – Histochemic, 1969. – Р. 116-126.
3. Химия БЭС / Под. ред. И. Л. Кнунянц. – 2-е изд. –М. : Большая Российская Энциклопедия, 1998. – 792 с.