Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра офтальмологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Кератиты бактериальной и вирусной природы являются одними из самых распространенных заболеваний роговицы. Увеличилось количество экзогенных факторов риска язв роговицы: неправильный режим ношения контактных линз, хирургические вмешательства, попадания инородных тел, повреждающих эпителий роговицы, - вследствие чего растет заболеваемость кератитами. Бактериальная и вирусная инфекция роговицы опасна и своими осложнениями, так как в ее исходе может возникнуть эпителиально-эндотелиальная дистрофия роговицы, перфорация с образованием помутнений и слепотой,   эндофтальмит и панофтальмит с последующей анатомической гибелью глаза. Кроме того, в последнее время отмечается развитие резистентности микроорганизмов по отношению к действию антибиотиков, что осложняет лечение бактериальных кератитов, поэтому возникла необходимость поиска нового способа лечения гнойных  кератитов [1].
Цель исследования:  в эксперименте in vivo изучить эффективность интрастромального ведения аутологичных мононуклеаров крови в лечении индуцированного повреждения роговицы.
Материал и методы: в стерильных условиях 20 половозрелым кроликам породы Шиншилла массой 2,5-4,0 кг выполнялась тотальная деэпителизация роговицы и механическое повреждение стромы и эндотелия роговицы [2]. В зависимости от способа лечения животные были разделены на 2 группы: основную (n=10, 20 глаз) и группу сравнения(n=10, 20 глаз). Животным основной группы вместе с инстилляциями раствора антибиотика (ципролет) 6 раз в день и репаранта роговицы (корнерегель) 3 раза в день в строму роговицы вводили мононуклеары, взятые из крови экспериментального животного. Мононуклеары выделяли методом фракционирования в градиенте плотности на разделяющем растворе фиколл-верографин [3]. В ходе эксперимента хирургическую манипуляцию выполняли от 1 до 3 раз с интервалом 3-4 дня в зависимости от степени тяжести заболевания и динамики клинической картины. В группе сравненения проводилась только фармакотерапия  ципролетом 6 раз в день и корнерегелем 3 раза в день.
Общая продолжительность эксперимента составила 21 сутки. Забор материала производился на 3, 7, 14, 21 сутки от начала эксперимента. Из каждой группы с помощью воздушной эмболии выводили по 2 животных с последующей энуклеацией обоих глаз, полученный материал фиксировали для световой микроскопии.
Результаты гистологического исследования: на 3 сутки у животных основной группы  эпителий роговицы был представлен 5-6 слоями плоских клеток. Задняя пограничная мембрана видна на всем протяжении. Основное вещество было представлено  пучками  коллагеновых волокон, расположенных неупорядоченно. В строме диффузная    мононуклеарная инфильтрация, занимающая почти треть толщины роговицы.
В группе сравнения эпителий роговицы был представлен эпителиоцитами с гидропической дистрофией. Подлежащая строма роговицы отечна, коллагеновые волокна в ней располагаются в виде рыхлой сети. Область лимба густо инфильтрирована полиморфноядерными лейкоцитами. Эндотелий десквамирован. Просвет передней камеры глаза заполнен мелкозернистыми оксифильными массами с примесью лимфоцитов и лейкоцитов.
На 7 сутки в основной группе эпителий роговицы животных также был представлен 5-6 слоями плоских клеток. Базальные эпителиоциты активно пролиферировали. Передняя пограничная мембрана хорошо визуализировалась на всем протяжении. В строме роговицы ход коллагеновых пучков становился более упорядоченным. В области лимба обнаруживалось диффузное скопление мононуклеарных клеток. Задняя пограничная мембрана определялась на всем протяжении. Эндотелий роговицы сохранялся практически на всем протяжении и был представлен 1 слоем пролиферирующих эндотелиоцитов кубической формы.
В группе сравнения клетки эпителия роговицы располагались в 6-7 слоев и имели кубическую форму. На поверхности эпителия обнаруживались очаговые отложения фибрина. В строме роговицы наблюдалась диффузная лимфомоноцитарная инфильтрация,  и определялись тонкостенные новообразованные сосуды. Задний эпителий представлял собой 1 ряд плоских клеток, местами был слущен.
На 14-е сутки у животных основной группы эпителий роговицы состоял из 4-5 слоев плоских клеток, эпителиоциты базального слоя имели кубическую форму,   в  ядрах единичных из них наблюдались  митозы. Боуменова мембрана определялась на всем протяжении. Строма роговицы содержала упорядоченно расположенные пучки коллагеновых волокон. Задняя пограничная мембрана сохраняла такую же толщину, что и  в предыдущие сроки. Эндотелий роговицы был представлен 1 слоем призматических клеток.
В группе сравнения  эпителий роговицы состоял из 4-5 слоев плоских клеток, базальные эпителиоциты имели высокую призматическую форму и гиперхромные ядра. Пограничная мембрана была гомогенной, несколько утолщенной. В строме роговицы сохранялся умеренный отек. В задней трети стромы собственное вещество роговицы было гомогенным, при этом дифференцировать волокнистые структуры не представлялось возможным вследствие деструкции основного вещества. В области лимба в строме роговицы обнаруживались сосуды, у некоторых стенка был выстлана гладкими  миоцитами.
На 21 сутки у животных основной группы эпителий роговицы имел нормальное строение. Передняя и задняя пограничные мембраны определялись на всем протяжении. Строма роговицы нормальной толщины, представлена упорядоченно расположенными коллагеновыми волокнами.
У животных группы сравнения эпителий роговицы также имел нормальное строение. Передняя пограничная мембрана определялась на всем протяжении, но была несколько утолщенной. В задних отделах стромы сохраняется отек и гомогенизация.
Выводы: таким образом, экспериментально установлено, что интрастромальное введение аутологичных мононуклеаров при повреждениях роговицы стимулирует регенерацию, обеспечивая быстрое заживление  и препятствуя при этом избыточному рубцеванию и неоваскуляризации роговицы.
    Список литературы:
1.     Глазные болезни / Под  ред. Копаевой В. Г. –  М. : Медицина, 2002. – 230 с.
2. Естественный комплекс цитокинов в лечении проникающих ранений роговицы глаза кролика в эксперименте / Л. В. Ковальчук, Л. В. Ганковская, Т. П. Крайнова // Бюл. экспер. биол. – 1993. – № 3. – С. 284-286.
3. Введение в методы культуры клеток, биоинженерии органов и тканей / под ред. Новицкого В. В., Шахова В. П. – Томск, 2004. – 167 с.