Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.

 

Скачать сборник (формат MS Word, 7,3 мб)

Посмотреть основную информацию о сборнике, обложку и т.д.

 

Актуальность: на сегодняшний день перед экспериментальной и клинической медициной остро стоит проблема приживления кожных трансплантатов. Одним из важнейших факторов данного процесса является васкуляризация трансплантата, поэтому учеными ведется активный поиск различных стимуляторов ангиогенеза. Одним из таких стимуляторов является ангиогенин - полипептид с рибонуклеазной активностью, индуцирующий образование кровеносных сосудов при крайне малых концентрациях [4]. Несмотря на противоречивые данные экспериментальных исследований и клинических опытов его применения интерес к нему сохраняется [2]. В доступной литературе нами не обнаружено единых критериев показателей динамики ангиогенеза. Морфометрические и статистические методы оценки стимулированных новообразующихся сосудов не унифицированы. Затруднения в оценке ангиогенных свойств различных факторов возникают вследствие того, что их действие in vivo и in vitro не совпадает. Так, вещество с явным стимулирующим ангиогенным действием in vitro зачастую оказывается нейтральным или ингибирующим ангиогенез in vivo и наоборот [1].

Цель: оценить сосудистую реакцию аутотрансплантата несвободного аксиального пахового лоскута с транспозицией под влиянием рекомбинантной плазмидной ДНК содержащей клонированный ген ангиогенина человека Ang-1 (ангиогенин).

Материалы и методы: в качестве экспериментальных животных использовали половозрелых беспородных белых крыс обоего пола массой 200 – 220 гр. (N=40). Серии эксперимента:

1 серия – операция транспозиции несвободного аксиального пахового лоскута (n=15);

2 серия - операция транспозиции несвободного аксиального пахового лоскута с введением ангиогенина в дозе 1 мг/кг (n=15).

 

Контролем служила кожа паховой области интактных животных (n=10). Операцию аутотрансплантации с транспозицией несвободного аксиального пахового лоскута осуществляли по методике F. Finseth (1976) [5] под однократным внутримышечным наркозом раствором «Zoletil-50»®, 2 мг/кг («Virbac», Франция). Во 2-й серии эксперимента животным после выкраивания в лоскут вводили ангиогенин  в дозе 1 мг/кг (ООО «ГЕНТЕР», Новосибирск) субдермально в 5 точек. Материал забирали на 3, 5, 7, 10, 14-е сутки после операции. Сосудистое русло лоскута ис-следовали на макропрепаратах кожи крыс после внутрисосудистой инъекции синей массой Героты в бедренные вену и артерию под постоянным давлением 60–70 мм рт. ст. и 100–110 мм рт. ст., соответственно. Перестройку сосудистого русла лоскута исследовали под биноку-лярной лупой (х 100) микроскопа «Motic B1-220ASC» (Испания). Оценивали характер хода сосудов, степень ветвления, наличие анастомозов, дилатаций. Подсчитывали численную плотность артериальных и венозных сосудов на 1мм², включая звенья микроциркуляторного русла. Материал документировали протоколированием, зарисовками, фотографированием («Sony DSC-W170»).

Результаты: качественная и количественная оценка состояния сосудистого русла кожных лоскутов крыс 1 и 2-й серий не выявила существенных различий (реакция сосудов однотипна и сопоставима). На 3–и сут. в инъецированных препаратах кожи четко визуализируется граница между лоскутом и соседними тканями, прорастания сосудов в реципиентное ложе нет. Сосуды периферии лоскута имеют хаотичное направление, характеризуются повышенной извитостью и сильно дилатированы. Рисунок микроциркуляторного русла как таковой отсутствует. К 5–м сут. единичные сосуды прорастают границу лоскут - окружающие ткани, наблюдаются анастомозы. На 7–е сут. мелкие и средние сосуды прорастают через границу лоскута, появляющийся рисунок микроциркуляции наиболее выражен в лоскутах крыс 2-й серии. В центральной области лоскутов сохраняется вазодилатация. К 14–м сут. в лоскутах животных обеих серий отмечается прорастание через границу крупных артерий и вен, появляется выраженная сеть сосудов микроциркуляции. В центральной части аксиальные сосуды имеют прямолинейный ход с четким дихотомическим ветвлением. Контрольные показатели численной плотности артерий в зоне «подъема» лоскута составляют 4,48 [LQ=4,48; UQ=5,19], вен 18,06 [LQ=16,56; UQ=20,53] на 1 мм2. На 3-и сут. после операции численность артерий лоскутов 1-й серии сопоставима с контролем, а к 5–м и 7–м сут. снижается до 3,0 [LQ=2,0; UQ=4,0] и 4,0 [LQ=3,0; UQ=6,0], соответственно. К 14–м сут. данный показатель возрастает практически в 1,5-2 раза по сравнению с контролем. Численная плотность артерий лоскутов 2-й группы достоверно не отличается от показателей 1-й группы. Численная плотность вен после транспозиции лоскута в 1 и 2-й сериях снижалась по сравнению с контролем (р=0,008), начиная с 3-х сут. (14,0 [LQ=11,5; UQ=14,0]) вплоть до 14-х сут. Возможно, это обусловлено потерей дополнительных источников кровоснабжения и нарушениями лимфовенозного оттока. Полученные результаты сопоставимы с данными других авторов [3].

Выводы: данные результаты экспериментального исследования свидетельствуют о том, что субдермальное введение ангиогенина в лоскут в дозе 1мг/кг. существенно не влияет на ре-акцию сосудистого русла кожного трансплантата. Таким образом, механический перенос данных, полученных in vitro, в экспериментальные исследования на животных не оправдан и нуждается в дополнительных более тщательных исследованиях.