Известно, что для России и, особенно, для Томской области характерны высокие показатели заболеваемости иксодовым клещевым боррелиозом. Особая проблема заключается в частом развитии у больных сочетанного течения иксодового клещевого боррелиоза с другими инфекционными заболеваниями, передающимися клещами, одним из которых является гранулоцитарный эрлихиоз человека. В последние годы, в связи с появлением новых компьютерных технологий, возрос интерес к изучению субпопуляционной и функциональной гетерогенности клеток периферической крови в норме и при различных заболеваниях [3]. Метод компьютерной спектральной морфометрии клеток крови в настоящее время применяется для изучения и диагностики различных лимфопролиферативных заболеваний. Вместе с тем, публикаций, посвященных морфометрическому анализу клеток крови при инфекционных заболеваниях крайне мало [2]. Целью настоящей работы было изучение субпопуляционной и функциональной гетерогенности мононуклеарных клеток периферической крови у больных с моноинфекцией иксодового клещевого боррелиоза и у больных с микст-инфекцией: иксодовый клещевой боррелиоз и гранулоцитарный эрлихиоз человека.
Для выполнения данного исследования были получены мазки крови от 7 больных с диагнозом: острый иксодовый клещевой боррелиоз и от 5 больных, имеющих микст-инфекцию: острый иксодовый клещевой боррелиоз и гранулоцитарный эрлихиоз человека. Диагноз был подтвержден серологически с помощью метода иммуноферментного анализа. Мазки крови для выполнения морфометрии брали при поступлении пациентов в стационар до начала этиотропной терапии. В качестве контрольной группы были обследованы 9 здоровых человек, сопоставимого с основной группой пола и возраста, не имеющие на момент взятия крови и за два месяца до этого какого-либо острого заболевания, а также не подвергавшихся укусам клещей. Мазки крови фиксировали в этаноле и окрашивали раствором азурII-эозина по Романовскому-Гимзе. После чего, с помощью цифровой фотокамеры «Casio QV-100», установленной на тубус светового микроскопа, нами было сделано 173 фотографии мононуклеарных клеток в мазках периферической крови, полученных от больных людей, и 124 изображения этих клеток, полученных от здоровых людей. Для компьютерной спектральной морфометрии все цифровые изображения клеток были проанализированы с использованием специальной компьютерной программы ImageJ. Данная программа позволяет изучить следующие основные характеристики мононуклеарных клеток: 1) площадь клетки; 2) площадь ядра клетки; 3) ядерно-цитоплазматическое соотношение; 4) форму ядра клетки; 5) периметр клетки; 6) периметр ядра клетки; 7) максимальный диаметр клетки; 8) максимальный диаметр ядра клетки; 9) среднюю яркость ядра клетки; 10) средний минимум яркости ядра клетки; 11) средний максимум яркости ядра клетки; 12) общую площадь гранулярного хроматина в ядре; 13) процентное отношение площади, занимаемое гранулярным хроматином, к общей площади ядра клетки; 14) число глыбок гранулярного хроматина в ядре клетки; 15) средний размер глыбок гранулярного хроматина в ядре клетки. Известно, что каждая субпопуляция клеток крови отличается уникальным набором вышеперечисленных параметров [3, 4].
В результате проведенного морфометрического анализа все изученные изображения мононуклеарных клеток крови были разделены, в зависимости от площади и периметра клетки, а также с учетом ядерно-цитоплазматического соотношения, на 9 условных классов. При сравнении распределения мононуклеарных клеток крови, полученных от больных иксодовым клещевым боррелиозом, по отдельным классам с соответствующими значениями распределения клеток в контрольной группе достоверных отличий обнаружено не было. Однако, в мазках крови этой группы больных были найдены клетки класса 9, представляющие собой крупные моноциты со средней площадью клетки 269,7?2,1 мкм2, которые не встречались у обследованных нами здоровых людей. У больных с микст-инфекцией, в отличие от контроля и больных с моноинфекцией, не были обнаружены клетки класса 5 (площадью 132,8?4,1 мкм2) и класса 6 (площадью 148,0?2,6 мкм2), морфологически соответствующих широкоцитоплазменным лимфоцитам. Возможно, эти данные отражают изменения содержания соответствующих субпопуляций иммуноцитов в периферической крови больных микст-инфекции. Известно, что морфологию широкоцитоплазменных лимфоцитов могут иметь преимущественно цитотоксические Т-лимфоциты и нормальные киллеры [1] . Вместе с тем, в мазках крови больных микст-инфекцией, по сравнению с соответствующими значениями в контрольной группе, было обнаружено достоверное повышение (р?0,01) числа клеток класса 1 (площадью 65,2?6,6 мкм2) и класса 2 (площадью 85,7?4,4 мкм2), относящихся к малым лимфоцитам и морфологически соответствующим Т-хелперам, В-лимфоцитам и около 50 % цитотоксических Т-лимфоцитов [1]. Кроме того, в отличие от больных иксодовым клещевым боррелиозом, у пациентов с микст-инфекцией средняя площадь лимфоцитов оказалась достоверно ниже, чем в контроле (92,5?17,8 мкм2 против 110,9?17,1 мкм2; р?0,01). При анализе форм ядер мононуклеарных клеток у больных с микст- и моноинфекцией было выявлено достоверное увеличение, по сравнению с контрольными значениями числа клеток с дольчатой и неправильной формой ядер (р?0,01). Кроме того, важной отличительной особенностью моноцитов у больных с микст-инфекцией было появление клеток с крупными цитоплазматическими вакуолями, которые не встречались в контроле и у больных с моноинфекцией. Скорее всего, в цитоплазме этих клеток содержатся внутриклеточно паразитирующие эрлихии. В мононуклеарных клетках крови больных с микст- и моноинфекцией, по сравнению с контролем, было обнаружено достоверное снижение ядерно-цитоплазматического соотношения (р?0,01). Кроме того, показатели средней яркости ядер и среднего минимума яркости ядер мононуклеарных клеток, отражающих плотность конденсации хроматина, у больных с микст-инфекцией были достоверно выше, чем в контроле (р?0,01). В ядрах мононуклеарных клеток больных иксодовым клещевым боррелиозом и больных с микст-инфекцией было установлено значительное снижение, по сравнению с соответствующими значениями у здоровых лиц, таких показателей как площадь гранулярного хроматина в ядре, процентного отношения площади, занимаемого гранулярным хроматином, к общей площади ядра, числа глыбок и среднего размера глыбок гранулярного хроматина в ядре клетки (р?0,01 во всех случаях), что, по-видимому, свидетельствовало о повышении функциональной активности этих клеток у больных людей, поскольку гранулярный хроматин соответствует спирализованным малоактивным участкам гетерохроматина, в противоположность тонкодисперсному, агранулярному и функциональноактивному эухроматину.
Таким образом, полученные нами результаты компьютерного морфометрического анализа мононуклеарных клеток периферической крови больных с моно – и микст-инфекцией иксодового клещевого боррелиоза дают представление о функциональной активности клеток и могут быть использованы в качестве дополнительного теста для дифференциальной диагностики изолированной и сочетанной формы иксодового клещевого боррелиоза.

Список литературы:
1. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Брострофф, Д. Мейл. – М. : Мир, 2000. – 592 с.
2. Шилов, Б. В. Компьютерный морфометрический анализ структуры ядер лимфоцитов периферической крови человека в норме и при Эпштейн-Барр вирусной инфекции в условиях in vivo и in vitro : Автореф. дис. … канд. мед. наук / Б. В. Шилов. – Томск, 2001. – 16 с.
3. Benattar, L. Morphometric and colorimetric analysis of peripheral blood smears lymphocytes in B-cell disorders : proposal for a scoring system / L. Benattar, G. Flandrin // Leuk. Lymphoma. – 2001. – Vol. 42, N 1-2. – P. 29-40.
4. Nuclear texture measurements in image cytometry / A. Doudkine, C. Macaulay, N. Poulin et al. // Pathologica. – 1995. – Vol. 87, N 3. – P. 286-299.