Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 65-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2006 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

Поиск биохимических маркеров фиброза составляет одну из современных проблем медицины. Фиброзом печени страдают миллионы людей во всем мире, и это главная причина неонкологической смерти среди заболеваний системы пищеварения (приблизительно 30 тысяч летальных исходов в год) [1, 3]. Примерно у 40 % пациентов цирроз печени в течение многих лет протекает бессимптомно, но болезнь неизбежно прогрессирует и завершается появлением осложнений. Для постановки точного диагноза требуется биопсия печени. Биопсия печени подвергает пациентов потенциальному риску по инвазивности и неоднозначности интерпретации. Ни один из современных лабораторных методов исследования не позволяет выделить группу риска по прогрессированию фиброза печени. Разработка новых методов диагностики фиброза печени позволила бы контролировать прогрессирование заболевания и эффективность лечения.

Цель работы заключалась в исследовании биохимических показателей обмена коллагена и эластина в плазме крови и биоптате печени в зависимости от степени воспаления и стадии фиброза.

Материал и методики исследования. Было обследовано 52 больных фиброзом печени I – IV стадии, находящихся на лечении в 3-й Городской больнице: 12 человек с I стадией фиброза, 18 – со II, 6 – с III и 16 больных с IV стадией фиброза. Средний возраст больных – 40 лет. Группа контроля соответствовала по полу и возрасту группе обследуемых. Активность коллагеназы и  эластазы определяли по гидролизу соответствующих субстратов (коллагена, N-бутилоксикарбонил-L-аланин-n-нитрофенилового эфира). Активность α₂-макроглобулина (a₂-МГ), α₁-протеиназного ингибитора (α₁-ПИ) определяли по торможению гидролиза синтетического субстрата N-бензоил-L-аргинин этилового эфира трипсином. Содержание фракций гидроксипролина измеряли по цветной реакции с реактивом Эрлиха. Статистическую обработку проводили с помощью непараметрического критерия  Манна – Уитни, используя программу «STATISTICA 6.0».

Результаты и обсуждение. Результаты исследования активности ферментов, их ингибиторов,  содержание фракций гидроксипролина представлены в таблице.

                                                                                                                                         Таблица

Активность протеолитических ферментов и их ингибиторов, содержание фракций

гидроксипролина в плазме крови при фиброзе печени

Активность эластазы существенно не отличалась от контрольных значений, в то время как активность коллагеназы снижалась в 2 раза. По данным литературы, снижение активности коллагеназы происходит в результате накопления ее тканевых ингибиторов [1, 3]. Активность  α₁-ПИ, особенно a₂-МГ плазмы крови,  также была ниже относительно  контроля. Полученные изменения можно объяснить тем, что, как и все белки плазмы, эти ингибиторы синтезируются в печени, и снижение активности, вероятно, связано с нарушением белоксинтезирующей функции печени. Кроме того, α₂-МГ является ограничителем фиброгенеза, и при низкой его активности наблюдается усиленное образование коллагена.

Интенсивность процессов синтеза и распада коллагена отражают фракции гидроксипролина. Повышенное содержание свободного и пептидосвязанного гидроксипролина, выявленное в настоящем исследовании, отражает распад коллагена, а высокое содержания белково-связанного гидроксипролина является показателем повышенного синтеза нового коллагена [4]. Таким образом, при фиброзе печени стимулируется как образование, так и распад коллагена.

На следующем этапе исследовали активность ферментов, их ингибиторов, а также содержание фракций гидроксипролина в зависимости от активности воспалительного процесса в печени (от 2 до 14 баллов). Было выявлено, что при увеличении степени воспалительного процесса в ткани печени повышается активность эластазы, которая является маркерным ферментом дегрануляционной стадии активации нейтрофилов в плазме крови и других биологических жидкостях [2]. Активность ингибиторов меняется реципрокно: активность α₁-ПИ увеличивается, а активность  α₂-МГ, напротив, снижается, что характерно для неспецифической реакции воспаления [2]. От активности воспаления зависело содержание свободного гидроксипролина. Содержание пептидосвязанного и белково-связанного гидроксипролина при различной активности воспаления при фиброзе существенно не изменялось.

Так как фиброз в течение многих лет протекает бессимптомно, большинство больных обращаются к врачам на последней стадии развития – циррозе. Поэтому на следующем этапе оценивали активность протеолитических ферментов и их ингибиторов, содержания фракций гидроксипролина в зависимости от стадии фиброза (I–IV). Установлено, что на IV стадии, по сравнению с предыдущими, происходит снижение  активности эластазы,  α₁-ПИ и α₂-МГ, и существенно увеличивается содержание белковосвязанного гидроксипролина, что отражает избыточное образование соединительной ткани в печени.

При проведении корреляционного анализа  взаимосвязи показателей в плазме крови и ткани печени рассчитаны  положительные коэффициенты корреляции для коллагеназы, α₁-ПИ и белково-связанного оксипролина. Полученные данные можно использовать для контроля лечения и прогнозирования развития цирроза печени.

Список литературы:

1.        Валенкевич, Л. Н. Нецирротический фиброз печени / Л. Н. Валенкевич,  О. И. Яхонтова //Российский Гастроэнтерологический журнал. – 2000. – № 4. – C. 21–23.

2.        Веремеенко, К. Н. Протеолитические ферменты и их ингибиторы. Новые области применения в клинике. / К. Н. Веремеенко // Врачебное дело. – 1994. – № 1. – С. 8–13.

3.        Пинцани, М. Эволюция фиброза печени: от гепатита к циррозу / Массимо Пинцани // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2002. – Т. 12. – № 5. – С. 4–9.