Сибирский
государственный медицинский университет, г. Томск
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 65-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2006 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,5 мб)
Поиск
биохимических маркеров фиброза составляет одну из современных проблем медицины.
Фиброзом печени страдают миллионы людей во всем мире, и это главная причина неонкологической
смерти среди заболеваний системы пищеварения (приблизительно 30 тысяч летальных
исходов в год) [1, 3]. Примерно
у 40 % пациентов цирроз печени в течение многих лет протекает бессимптомно, но болезнь неизбежно прогрессирует и
завершается появлением осложнений. Для постановки точного диагноза требуется
биопсия печени. Биопсия печени подвергает пациентов потенциальному риску по
инвазивности и неоднозначности интерпретации. Ни один из современных лабораторных
методов исследования не позволяет выделить группу риска по прогрессированию
фиброза печени. Разработка новых методов диагностики фиброза печени позволила
бы контролировать прогрессирование заболевания и эффективность лечения.
Цель работы заключалась в исследовании
биохимических показателей обмена коллагена и эластина в плазме крови и биоптате
печени в зависимости от степени воспаления и стадии фиброза.
Материал и методики исследования. Было обследовано 52 больных фиброзом печени I – IV стадии, находящихся на лечении в 3-й Городской больнице: 12 человек с I стадией фиброза, 18 – со II, 6 – с III и 16 больных с IV стадией фиброза. Средний возраст больных –
40 лет. Группа контроля соответствовала по полу и возрасту группе обследуемых. Активность
коллагеназы и эластазы определяли по
гидролизу соответствующих субстратов (коллагена, N-бутилоксикарбонил-L-аланин-n-нитрофенилового эфира). Активность α2-макроглобулина
(a2-МГ), α1-протеиназного
ингибитора (α1-ПИ) определяли по торможению гидролиза синтетического
субстрата N-бензоил-L-аргинин этилового эфира
трипсином. Содержание фракций гидроксипролина измеряли по цветной реакции с
реактивом Эрлиха. Статистическую обработку
проводили с помощью непараметрического критерия
Манна – Уитни, используя программу «STATISTICA 6.0».
Результаты и обсуждение. Результаты
исследования активности ферментов, их ингибиторов, содержание фракций гидроксипролина
представлены в таблице.
Таблица
Активность протеолитических
ферментов и их ингибиторов, содержание фракций
гидроксипролина в плазме крови
при фиброзе печени
Показатели
|
Группы
|
Достоверность
|
Контроль
(n=30)
|
Фиброз
(n=52)
|
Эластаза,нмоль/мин·мл
|
100,14 ± 1,93
|
109,72 ± 17,03
|
p > 0,05
|
Коллагеназа,
мкмоль/ч·л
|
7,31 ± 0,05
|
3,71 ± 0,35
|
p < 0,05
|
α1-ПИ,
ИЕ/мл
|
26,42 ± 0,96
|
21,84 ± 3,64
|
p < 0,05
|
α2-МГ,
ИЕ/мл
|
3,86 ± 0,12
|
2,67 ± 0,18
|
p < 0,05
|
Свободный
гидроксипролин,
мкг/мл
|
0,60 ± 0,03
|
1,48 ± 0,05
|
p < 0,05
|
Пептидосвязанный
гидроксипролин, мкг/мл
|
0,46 ± 0,02
|
0,96 ± 0,06
|
p < 0,05
|
Белково-связанный
гидроксипролин, мкг/мл
|
6,73 ± 0.17
|
11,16 ± 0,39
|
p < 0,05
|
Активность
эластазы существенно не отличалась от контрольных значений, в то время как
активность коллагеназы снижалась в 2 раза. По данным литературы, снижение
активности коллагеназы происходит в результате накопления ее тканевых
ингибиторов [1, 3]. Активность α1-ПИ, особенно a2-МГ плазмы крови, также была ниже относительно контроля. Полученные изменения можно
объяснить тем, что, как и все белки плазмы, эти ингибиторы синтезируются в
печени, и снижение активности, вероятно, связано с нарушением белоксинтезирующей
функции печени. Кроме того, α2-МГ является ограничителем
фиброгенеза, и при низкой его активности наблюдается усиленное образование
коллагена.
Интенсивность
процессов синтеза и распада коллагена отражают фракции гидроксипролина.
Повышенное содержание свободного и пептидосвязанного гидроксипролина, выявленное
в настоящем исследовании, отражает распад коллагена, а высокое содержания
белково-связанного гидроксипролина является показателем повышенного синтеза
нового коллагена [4]. Таким
образом, при фиброзе печени стимулируется как образование, так и распад коллагена.
На следующем
этапе исследовали активность ферментов, их ингибиторов, а также содержание
фракций гидроксипролина в зависимости от активности воспалительного процесса в
печени (от 2 до 14 баллов). Было выявлено, что при увеличении степени
воспалительного процесса в ткани печени повышается активность эластазы, которая
является маркерным ферментом дегрануляционной стадии активации нейтрофилов в
плазме крови и других биологических жидкостях [2]. Активность ингибиторов меняется реципрокно: активность α1-ПИ
увеличивается, а активность α2-МГ,
напротив, снижается, что характерно для неспецифической реакции воспаления [2]. От активности воспаления зависело
содержание свободного гидроксипролина. Содержание пептидосвязанного и
белково-связанного гидроксипролина при различной активности воспаления при
фиброзе существенно не изменялось.
Так как фиброз
в течение многих лет протекает бессимптомно, большинство больных обращаются к
врачам на последней стадии развития – циррозе. Поэтому на следующем этапе
оценивали активность протеолитических ферментов и их ингибиторов, содержания
фракций гидроксипролина в зависимости от стадии фиброза (I–IV). Установлено, что на IV стадии, по сравнению с предыдущими, происходит снижение активности эластазы, α1-ПИ и α2-МГ, и
существенно увеличивается содержание белковосвязанного гидроксипролина, что
отражает избыточное образование соединительной ткани в печени.
При проведении
корреляционного анализа взаимосвязи
показателей в плазме крови и ткани печени рассчитаны положительные коэффициенты корреляции для
коллагеназы, α1-ПИ и белково-связанного оксипролина. Полученные
данные можно использовать для контроля лечения и прогнозирования развития
цирроза печени.
Список литературы:
1.
Валенкевич,
Л. Н. Нецирротический фиброз печени /
Л. Н. Валенкевич, О. И. Яхонтова //Российский Гастроэнтерологический журнал. – 2000. – №
4. – C. 21–23.
2.
Веремеенко, К. Н. Протеолитические ферменты и их
ингибиторы. Новые области применения в клинике. / К. Н. Веремеенко // Врачебное
дело. – 1994. – № 1. – С. 8–13.
3.
Пинцани, М. Эволюция фиброза печени: от гепатита
к циррозу / Массимо Пинцани // Российский журнал гастроэнтерологии,
гепатологии, колопроктологии. – 2002. – Т. 12. – № 5. – С. 4–9.
Ishii, T. Collagen and elastin degradation by
matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of matrix metalloproteinase in
aortic dissection / T. Ishii, N.
Asuwa // Hum Pathol. – 2000. – Vol. 31,
№ 6. – P. 640–646
|