Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 65-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2006 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

Актуальность проблемы. Несмотря на значительные успехи современной медицины в борьбе с инфекционными заболеваниями, туберкулез по-прежнему представляет собой серьезную медико-социальную проблему. При этом одним из наиболее значимых факторов нарушений иммунных процессов при туберкулезе является структурная перестройка мембран лейкоцитарных клеток крови (моноцитов и лимфоцитов), играющих ведущую роль в обеспечении противотуберкулезной защиты макроорганизма [4].

Известно, что основу структурной организации клеточных мембран составляет липидный бислой с асимметрично встроенными белками [2]. Специфическая укладка полипептидных цепей интегральных и периферических белков определяется и стабилизируется окружающими их липидными молекулами. Структурные перестройки липидной фазы могут носить «повреждающий» характер и служить одним из факторов нарушений функциональных  свойств иммуноцитов [3]. Нормальное функционирование плазматической мембраны зависит также от ее микровязкостных свойств [1]. Поддержание текучести мембраны на физиологическом оптимальном уровне необходимо для осуществления латеральной диффузии белковых и липидных молекул, трансмембранного флип-флоп-переноса липидов. Однако данные относительно характера структурных нарушений в плазматической мембране мононуклеаров крови при туберкулезе легких носят весьма фрагментарный, несистематизированный характер и не позволяют однозначно оценить направленность и динамику патологических изменений при инфекционном процессе.

Целью настоящего исследования явилось изучение микровязкостных свойств и липидного состава мембран мононуклеарных клеток крови при туберкулезе легких.

Материал и методы исследования. В ходе работы было обследовано 9 пациентов (мужчин и женщин) в возрасте 20–5 лет, страдающих диссеминированным туберкулезом легких (ТЛ). Диагноз ТЛ устанавливали на основании данных микроскопии мокроты и рентгенологического исследования легких (общепринятые методы). Контрольную группу составили 9 здоровых мужчин в возрасте 22–55 лет. Материалом исследования служили мононуклеарные лейкоциты периферической крови, взятой утром натощак из локтевой вены. Выделение лимфоцитов и моноцитов из крови осуществляли на градиентах плотности фиколл-урографина 1,077  и 1,083 г/см³  соответственно.

Оценку микровязкостных свойств мембран мононуклеарных клеток проводили путем определения их собственной флуоресценции  и флуоресцентного зондирования зондом пирен. Рассчитывали коэффициенты эксимеризации пирена и процент  индуктивно-резонансного переноса энергии.

Изучение липидного спектра мембран моноядерных лейкоцитов периферической крови определяли методом тонкослойной хроматографии. Результаты выражали в ммоль фосфора/мг белка. Содержание белка в мембранах лимфоцитов и моноцитов определяли микробиуретовым методом. Концентрацию неорганического фосфора находили по методу Бодански.

Статистический анализ данных осуществляли с помощью критериев Стьюдента и Манна –Уитни с использованием программы Statistica for Windows Version 6.0.

Результаты исследования. Проведенное нами исследование показало, что  в лимфоцитах периферической крови у больных диссеминированным ТЛ имеет место увеличение (по сравнению с нормой) коэффициентов эксимеризации пирена (I_470/370 и I_470/390) при длине возбуждающего света 285 нм (табл.). При этом процент индуктивно-резонансного переноса энергии с триптофана на пирен у больных инфильтративным ТЛ до начала химиотерапии достоверно снижался в сравнении с уровнем контроля.

Таблица

Показатели флуоресцентного зондирования мембран мононуклеаров крови и липидный спектр у здоровых доноров у больных туберкулезом легких ( ± m)

Примечание: ТЛ – туберкулёз лёгких, р₁ – уровень статистической значимости различий по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров.

       Поскольку величина эксимеризации пирена обратно пропорциональна вязкости липидного компонента мембран, выявленное достоверное увеличение средних величин данных показателей указывает на понижение упорядоченности липидных молекул в мембранах мононуклеарных лейкоцитов, а следовательно, повышение текучести их  мембран [3]. Достоверное снижение индуктивно-резонансного переноса энергии позволяет судить о нарушении белково-липидных взаимодействий в мембране клеток. 

       Однако при изучении липидного спектра мембран выявлялось снижение соотношения фосфолипидной фракции к содержанию холестерина в мембранах мононуклеарных клеток крови у больных ТЛ по отношению с аналогичными показателями у здоровых доноров. Отмечено увеличение уровня свободного холестерина и его эфиров (табл.).

Анализ полученных результатов позволяет полагать, что изменения вязкоэластичных свойств мембран мононуклеаров крови при ТЛ на фоне повышенного содержания холестерина подтверждает теорию наличия в плазматических мембранах обогащенных и истощенных холестерином участков при данной патологии. Известно, что холестерин накапливается в мембране клеток макроорганизма в местах проникновения микобактерий туберкулеза, обеспечивая защиту бациллы от губительного действия лизосомальных ферментов и свободных радикалов, а неравномерное распределение холестерина в плазматической мембране приводит к ее структурным перестройкам, образованию своего рода холестериновых «брешей», чем, вероятно, и объясняется снижение вязкости липидного компонента мембран [5].

Таким образом, течение ТЛ характеризуется снижением фосфолипидно-холестеринового соотношения и микровязкости в мембранах иммуноцитов.

Список литературы:

1.           Владимиров, Ю. А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю. А. Владимиров - М. : Наука, 1980. – 320 с.

2.           Извекова, А. А. Липиды мембран и функции иммунокомпетентных клеток в норме и при патологии / А. А. Извекова // Успехи современной биологии. – 1991. – Т. 111, № 4. – С. 577–590.

3.           Кузьмичева, Л. В. Изменения фосфолипидного состава мембран лимфоцитов при бронхолёгочных заболеваниях / Л. В. Кузьмичева, Р. Е. Киселева, О. С. Новожилова // Иммунология. – 2005. – № 5. – С. 304–308.

4.             Маянский, А. Н. Туберкулез (микробиологические и иммунопатогенетические аспекты) / А. Н. Маянский // Иммунология. – 2001. – № 2. – С. 53–63.