Постоянный рост ожогового травматизма во всех странах мира и высокая летальность среди обожженных существенным образом стимулировали проведение исследований в области патогенеза и лечения ожогов. За последние десятилетия удалось значительно продвинуться в понимании механизмов развития ожогового шока, эндотоксемии, инфекции, течения раневого процесса [1,4].
Иммунометаболические нарушения являются одним из центральных механизмов развития ожоговой травмы, обуславливающие характер течения патологического процесса и его прогноз. Давно и широко известны факты о наличии тесной взаимосвязи между нейроэндокринной и иммунной системами. Наличие иммуномодулирующих свойств у нейропептидов существенно дополняет существующие представления о механизмах передачи сигналов от нервной системы к иммунной. На иммунокомпетентных клетках обнаружены рецепторы ко многим известным нейропептидам. Являясь ведущим компонентом антистрессорной системы организма, опиоиды не только подавляют продукцию стрессорных гормонов (АКТГ, кортизола, катехоламинов), но и проявляют иммуномодуляторные свойства.
В связи с этим одной из актуальных задач современной экспериментальной и клинической камбустиологии является изучение иммунологического звена патогенеза ожоговой травмы и разработка методов иммунокоррекции [3]. Поэтому вызывает большой интерес перспектива использования природных и синтетических опиоидных пептидов, которые обладают уникальной совокупностью физиологических свойств
[2,5].
Целью работы явилось изучение влияния различных доз опиоидных пептидов (ОП) DSLET, DAGO и динорфина А (1-13) на показатели иммунной реактивности.
Материалы и методы. Эксперименты проведены на крысах Wistar и мышах линии CBA. Термический ожог ШБ степени, охватывающий около 30% поверхности тела, получали на участке кожи спины животных с помощью устройства, поддерживающего температуру на уровне 1000С при экспозиции 8 сек. В работе использованы синтетические препараты агонистов отдельных классов опиоидных рецепторов (ОР): DAGO (Тир-Д-Ала-Гли-^Метил-Фен-Гли-ол) - селективный агонист мю-ОР, DSLET (Тир-Д-Сер-Гли-Фен-Лей-Трп) -селективный агонист дельта-ОР, динорфин А (1-13) (Тир-Гли-Гли-Фен-Лей-Арг-Арг-Илей-Арг-Про-Лиз-Лей-Лиз) - селективный агонист каппа-ОР. Пептиды были синтезированы в лаборатории синтеза пептидов Института экспериментальной кардиологии КНЦ РАМН (зав. лабораторией, д.х.н. Ж.Д. Беспалова). ОП вводили пятикратно внутрибрюшинно с интервалом в 24 часа в эквимолярных дозах в следующем диапазоне: DSLET - 1; 10; 100 мкг на 1 кг массы тела; DAGO - 0,63; 6,3; 63 мкг на 1 кг массы тела и динорфин А (1-13) -2,02; 20,2; 202 мкг на 1 кг массы тела соответственно. Первую инъекцию производили непосредственно после нанесения ожога. Животных иммунизировали однократным внутрибрюшинным введением эритроцитов барана (ЭБ) в дозе 2х109 клеток на килограмм массы тела. Выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) на ЭБ оценивали по количеству клеток, образующих антитела (АОК) к ЭБ в селезенке через 5 суток после иммунизации. Число АОК к ЭБ определяли методом прямого локального гемолиза в камерах Конгейма. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл физиологического раствора (разрешающая доза). Спустя 24 ч выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатеральный подколенный лимфоузлы. О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них ядросодержащих клеток. Определяли функционально-метаболическую активность (ФМА) нейтрофильных гранулоцитов периферической крови (фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, НСТ-тест) на 2 и 6 сутки после экспериментальной ожоговой травмы (ЭОТ) для определения динамики изменения этих показателей в процессе развития ожоговой болезни и на 6 сутки после ЭОТ на фоне введения ОП. Рассчитывали индекс активности фагоцитоза (ИАФ) - произведение числа фагоцитированных бактерий и процента фагоцитирующих клеток деленное на число подсчитанных клеток; индекс стимуляции нейтрофилов - отношение диформазан-позитивных клеток в стимулированной реакции к диформазан-позитивным клеткам в спонтанной реакции НСТ-теста и функциональный резерв - разницу между диформазан-позитивными клетками в стимулированной реакции и диформазан-позитивными клетками в спонтанной реакции НСТ-теста.
Результаты исследований и их обсуждение. ЭОТ угнетала развитие ГИО и ГЗТ: количество АОК к ЭБ в селезенке на 5 сутки уменьшалось в 4,4 раза; разница масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов снижалась в 2,5 раза, а разница количества кариоцитов в этих лимфатических узлах - в 2 раза. Нарушение ФМА нейтрофильных гранулоцитов периферической крови выражалось в резкой активации кислородзависимых бактерицидных механизмов, при одновременном снижении числа фагоцитирующих клеток и среднего количества поглощенных одним фагоцитом частиц. Более выраженные изменения изучаемых показателей наблюдались на шестые сутки после ЭОТ. Однако активация кислородзависимых бактерицидных механизмов не являлась эффективной, о чем свидетельствовало прогрессивное снижение индекса стимуляции нейтрофилов и функционального резерва на фоне уменьшения индекса активности фагоцитоза в течение шести суток эксперимента.
Введение DSLEТ в дозах 100, 10 мкг/кг массы тела, DAGO в дозе 63 мкг/кг массы тела и динорфина А (1-13) в дозе 20,2 мкг/кг нормализовало развитие ГИО и ГЗТ у животных с ЭОТ. DSLEТ в дозе 1 мкг/кг, DAGO в дозе 6,3 мкг/кг достоверно корригировали нарушения ГИО и ГЗТ, но не нормализовали иммунологическую реактивность на ЭБ. DAGO в дозе 0,63 мкг/кг, динорфин А (1-13) в дозах 202 и 2,02 мкг/кг не влияли на супрессию ГИО и ГЗТ у животных, вызванную ЭОТ.
Динамика изменений изучаемых показателей ФМА нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у животных с ЭОТ, получавших ОП, характеризовалась следующими особенностями. Введение DSLEТ в дозе 100 мкг/кг нормализовало все исследуемые показатели ФМА; в дозе 10 мкг/кг корригировало их до уровня, определяемого на 2 сутки после ЭОТ; а в дозе 1 мкг/кг увеличивало ФИ, ФЧ, ИАФ в 1,2; 1,5 и 1,8 раза соответственно, снижало количество диформазан-положительных клеток в спонтанной и индуцированной реакциях НСТ-теста в 1,5 и 1,3 раза, а также повышало функциональный резерв и индекс стимуляции нейтрофилов в 1,4 и 1,2 раза, при этом, не доводя эти показатели до уровня, определяемого на 2 сутки после ЭОТ. DAGO в дозе 63 мкг/кг нормализовал все показатели ФМА, за исключением количества диформазан-позитивных клеток в спонтанной реакции НСТ-теста и индекса стимуляции нейтрофилов; в дозе 6,3 мкг/кг повышал ФИ, ФЧ, ИАФ в 1,3; 1,5 и 1,9 раза соответственно, снижал количество диформазан-положительных клеток в спонтанной и индуцированной реакциях НСТ-теста в 1,4 и 1,3 раза, а также повышал функциональный резерв и индекс стимуляции нейтрофилов в 1,4 и 1,1 раза, при этом, не доводя эти показатели до уровня, определяемого на 2 сутки после ЭОТ. В дозе 0,63 мкг/кг DAGO не влиял на показатели ФМА нейтрофилов у животных с ЭОТ. Введение динорфина А (1-13) в дозе 202 мкг/кг достоверно снижало количество диформазан-положительных клеток в спонтанной и индуцированной реакциях НСТ-теста в 1,2 и 1,1 раза и увеличивало ФЧ в 1,2 раза, не влияя при этом на индекс стимуляции нейтрофилов, функциональный резерв, ИАФ и ФИ; в дозе 20,2 мкг/кг корригировало показатели ФМА нейтрофилов до уровня, определяемого на 2 сутки после ЭОТ. В дозе 2,02 мкг/кг ОП динорфин А (1-13) не влиял на показатели ФМА нейтрофилов у животных с ЭОТ.
Заключение. Введение опиоидных пептидов DSLET, DAGO и динорфина А (1-13) у животных с ЭОТ уменьшает степень супрессии ГИО и ГЗТ, предупреждает угнетение функционально-метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови. Иммуномодулирующие эффекты опиоидных пептидов при ЭОТ объясняются, по-видимому, во-первых, их антистрессорным эффектом, во-вторых, прямым влиянием на иммунокомпетентные клетки через специфические рецепторы клеточной мембраны или сочетанием данных механизмов. Выявленные закономерности являются проявлением общего механизма регуляции, осуществляемого опиоидергической системой организма.