В последние годы наблюдается неуклонный рост заболеваний, ассоциированных с нарушением состава нормальной микрофлоры, что связано с нарастающей агрессивностью окружающей среды, дестабилизацией экологической ситуации, нарушением схем антибиотикотерапии и другими факторами. Наибольшее значение среди микробиоценозов имеет микрофлора желудочно-кишечного тракта, так как именно нарушения в ее составе наиболее часто отягощают течение других нозологий и оказывают многоплановое влияние на защитные, адаптационные и обменные реакции организма. Дисбактериозы относятся к числу наиболее распространенных синдромов, которые развиваются на фоне снижения иммунологической защиты. Этот симптомокомплекс проявляется наибольшим разнообразием клинических диагнозов и вариантов течения, начиная от латентных форм и заканчивая такими системными патологиями как сепсис.
В настоящее время широкое распространение дисбактериозов справедливо считают одним из важнейших факторов, приводящих к увеличению частоты и тяжести  острых инфекционных и хронических заболеваний. Доказано, что в большинстве случаев соматические и инфекционные патологии желудочно-кишечного тракта сопровождаются дисбактериозом кишечника, который провоцирует их затяжное лечение и способствует развитию осложнений.    С этих позиций проблема борьбы с дисбактериозом кишечника приобретает все большую актуальность для самых различных отраслей клинической медицины и делает необходимым своевременную и точную диагностику дисбактериоза, а также поиск правильных путей его коррекции и профилактики [1,2,3,4].
Особого внимания заслуживают дисбиотические нарушения у детей.  Целью нашей работы было исследование состояния микрофлоры желудочно-кишечного тракта у детей первого года жизни и оценка обсемененности патогенной и условно-патогенной микрофлорой. Работа проводилась в лаборатории дисбактериозов в Нижегородском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии имени И.Н. Блохиной. Для оценки степени нарушения микрофлоры был проведен ее качественный и количественный анализ культуральным методом.
В качестве исследуемого материала забирался свежевыделенный кал.  Материал засевался на селективные питательные среды для энтеробактерий (Плоскирева и Эндо), дополнительно проводился высев на кровяной агар для обнаружения гемолизирующей флоры, на желточно-солевой агар для выделения бактерий рода Staphylococcus и на среду Сабуро  для выделения грибов рода Candida. Анаэробную бифидофлору высевали на среду Блаурокка, а лактобациллы на – МРС-1. Через 24 ч культивирования производился учет результатов и подсчет колоний, выросших на среде Плоскирева, Эндо и на кровяном агаре. На среде Эндо подсчитывалось общее количество лактозопозитивных колоний, отбирались по 1–2 ярко-красных и бледно-розовых  колоний, которые засевались на селективно-дифференциальные питательные среды (агар Олькеницкого) для идентификации энтеробактерий по биохимической активности. Со среды Плоскирева отбирались бесцветные, прозрачные, мелкие и средние колонии, окрашенные в черный цвет, и пересевались на короткий ряд. На кровяном агаре учитывались гемолитические и негемолитические колонии. С кровяного агара производились пересевы нескольких колоний с прозрачной зоной гемолиза на среду Олькеницкого для подтверждения их принадлежности к E. coli. Через 48 ч производится учет культур на средах Блаурокка и МРС-1, на желточно-солевом агаре и на среде Сабуро. На желточно-солевом агаре подсчитывалось количество всех выросших колоний, колоний с золотистым пигментом и окруженных радужным венчиком, принадлежащих к S. aureus. Последние отбирались и окрашивались по Граму. Из культур на средах Блаурокка, МРС-1 и Сабуро также готовились мазки, окрашивались по Граму и микроскопировались. Учитывались  результаты роста на коротких рядах для всех культур.
    Анализ данных производился после разделения детей (152 ребенка) на три возрастные группы: первая (I группа) – 38 детей в возрасте до 1 месяца; вторая (II группа) – 45 детей от 1 до 3 месяцев; третья (III группа) – 69 детей от 3 месяцев до 1 года. Был проанализирован количественный состав нормофлоры кишечника. Он включал в себя определение содержания облигатных анаэробов рода Bifidobacterium. Оказалось, что количественный состав Bifidobacterium в большей степени нарушен у детей I группы (до месяца). Существенное снижение содержания Bifidobacterium в этой группе составляет 50% и незначительное снижение – 34%. Таким образом в норме Bifidobacterium обнаружены лишь у 16% детей, в то время как во II  и III группе нормальное содержание бифидофлоры обнаружено у  29% и 28% детей, а существенное снижение у 44% и 47% соответственно. Наименьшее количество облигатно анаэробной микрофлоры у детей до месяца можно объяснить тем фактом, что, во-первых, у новорожденных с первых дней жизни происходит заселение кишечника разнообразной микрофлорой и специфические адгезионные механизмы, ответственные за колонизацию индигенными микроорганизмами еще не сформированы. Вследствие этого появляется возможность заселения кишечника слабовирулентными микроорганизмами и развития транзиторного дисбактериоза. Во-вторых, на состояние бифидофлоры во многом влияет характер вскармливания. Грудное молоко обладает  сильным бифидогенным действием и содержит различные иммуногенные факторы защиты, способствующие формированию нормального микробиоценоза, высокий уровень содержания IgA компенсирует физиологический дефицит секреторных иммуноглобулинов новорожденного и защищает слизистые от условно-патогенных и патогенных возбудителей кишечной инфекции.  В настоящее время многие дети с самого рождения находятся на искусственном вскармливании, в результате чего ребенок лишается ряда компонентов пассивного естественного иммунитета (иммуноглобулинов, лактоферрина и т.д.), тогда как собственные защитные механизмы еще находятся в стадии формирования, что и приводит к уменьшению содержания бифидофлоры и увеличению заселения факультативной микрофлорой. Поэтому нормофлора детей первого месяца жизни оказывается наименее стабильной. Дестабилизация в количественном составе Bifidobacterium является предрасполагающим фактором для развития дисбактериоза, а некоторыми авторами расценивается даже как самостоятельный дисбиотический процесс [5].
На втором этапе исследования был проанализирован качественный состав микроорганизмов, принадлежащих к семейству Enterobacteriaceae, являющихся наиболее частой причиной развития тяжелых кишечных инфекций. У детей всех исследуемых групп наиболее часто высевались условно-патогенные бактерии семейства Enterobacteriaceae: Klebsiella, Proteus, Citrobacter, Enterobacter. В I группе условно-патогенные энтеробактерии не выделялись у 44% детей, во II группе у 17% и в III группе у 10% детей. Закономерность возрастания обсемененности энтеробактериями во II и III группах наблюдалась в связи с переводом ребенка с грудного вскармливания на искусственное и постепенным началом прикорма. Введение прикорма в данном случае представляет собой вмешательство в обменные процессы в организме ребенка, что и отразилось на составе микрофлоры. Резкое возрастание обсемененности   энтеробактериями в III группе может быть обусловлено также частыми острыми вирусными инфекциями у детей раннего возраста и применением антибиотиков [2].
 Лидером среди бактерий семейства Enterobacteriaceae является Klebsiella. В I группе бактерии высевались у 42% детей, во II группе – у 61% и III группе – у 58%. Численное преобладание бактерий рода Klebsiella вероятнее всего связано с наличием Т-независимого полисахаридного капсульного антигена. На втором месте по частоте встречаемости находится Citrobacter: в I группе – у  8% детей, во II и III – 9% и 20% соответственно. У 3%, 9% и 10% детей в I, II и III группах соответственно высеваются бактерии рода Proteus. Остальные микроорганизмы – представители семейства  Enterobacteriaceae обнаруживаются редко.
     Помимо анализа частоты обнаружения были проанализированы биохимический профиль и гемолитическая активность штаммов E. coli. Лактозопозитивная типичная палочка в I группе в норме выделяется у 44% детей, а у 11% наблюдается снижение типичной  E. coli. Таким образом, эти дети попадают в группу риска по дисбактериозу. Действительно у 45% наблюдаемых в этой возрастной группе детей наблюдаются серьезные нарушения: выделение лактозонегативной кишечной палочки – 16%, гемолитической палочки – 16%, и у 13% детей наличие гемолитической палочки кореллирует со снижением типичной E. coli. Во II группе в норме высевается лактозопозитивная кишечная палочка у 45% детей, гемолитическая у 33%, что в 2 раза больше, чем в I группе, у 9% детей отмечено одновременное снижение типичной и наличие гемолитической E. coli, а у 4% детей одновременно выделена гемолитическая и лактозонегативная кишечная палочка. В III группе в норме высевается лактозопозитивная палочка у 36% детей, снижение типичной наблюдается у 1%. У 38% детей третьей группы выделена гемолитическая, у 12% – лактозонегативная и для 6% детей отмечено одновременное выделение гемолитической палочки и снижение типичной E. coli. Таким образом, от I к III группе происходит уменьшение доли типичной кишечной палочки и увеличение доли лактозонегативных и гемолитических штаммов (р<0,05), что создает риск замены непатогенных штаммов энтеротоксигенными, энтеропатогенными и энтерогемморагическими.
Исследование содержания S. aureus показало, что в I группе золотистый стафилококк выделяется у 68% детей, во II группе у 56% и в III группе у 52% детей. Наибольшую частоту обнаружения S. aureus в I группе можно объяснить тем, что золотистый стафилококк колонизирует новорожденных детей в родильных домах, а источником могут быть роженицы, другие дети, персонал родильного дома, предметы обихода, медицинское оборудование, создающие условия для нозокомиального инфицирования.    Прямо противоположная тенденция выявлена для грибов рода Candida. В I группе грибы рода Candida выделяются у 5% детей, во II группе у 11%, в III группе у 26% детей. Выделение грибов у новорожденных детей может быть связано с кандидозом матери, транзиторным дисбактериозом, заселением в родильном доме. Возрастание степени обсемененности у детей III группы могло быть обусловлено наличием молочницы, применением антибиотиков, иммунодефицитными состояниями у детей.
Была обнаружена и проанализирована зависимость между нормальным содержанием бифидобактерий и кишечных палочек. Оказалось, что у 71% детей в I группе выявляется корреляция между содержанием бифидобактерий и кишечных палочек. В общем случае у детей с высоким титром бифидобактерий отсутствуют нетипичные кишечные палочки и не снижено содержание типичных E. coli. Данная зависимость подтверждается у 58% детей во II группе и 67% у детей III группы. Таким образом, доказывается, что при снижении количества представителей облигатной микрофлоры с выраженными антагонистическими свойствами, происходит ослабление колонизационной резистентности организма и их место занимают условно-патогенные бактерии [4,5].
На заключительном этапе было проанализировано наличие и степень выраженности дисбактериоза у детей в 3 группах в соответствии с отраслевым стандартом Министерства здравоохранения. Из проведенного качественного и количественного анализа следует, что  у детей превалирует 3 степень микробиологических нарушений кишечника: у 66% детей I  группы, у 78% во II группе и 83% в III группы. Таким образом, у большинства исследуемых детей отмечается дисбаланс нормофлоры и обнаруживаются ассоциации условно-патогенных микроорганизмов [6].  Микрофлора желудочно-кишечного тракта поддерживается в состоянии динамического равновесия с факторами внутренней и внешней среды. Это равновесие обусловлено тонко сбалансированным взаимодействием между эпителиоцитами слизистой желудочно-кишечного тракта, самой микрофлорой и другими составляющими неспецифической резистентности. У детей эти взаимодействия носят лабильный характер и зависят от анатомо-физиологических особенностей желудочно-кишечного тракта, возраста, характера питания и образа жизни. Качественное и/или количественное изменение состава микрофлоры у детей в различные периоды жизни имеют свои особенности. В связи с этим, микроэкологические нарушения кишечника у детей достаточно часто сопровождают физиологические процессы, обусловленные становлением иммунной, эндокринной, нервной и других систем и не требуют медикаментозной коррекции. Однако длительные нарушения микрофлоры, сопровождающиеся ростом факультативной микробной флоры, могут приводить к нарушениям гомеостаза и в ряде случаев проявляются клинически в виде различных симптомов [7].