Западная Сибирь является самым напряженным в мире очагом инвазии по описторхозу. По данным Центра гигиены и эпидемиологии Томской области, в г.Томске и районах Томской области ежегодно регистрируется от 761,7 до 1448,2 взрослых и от 1381,9 до 13982,3 детей, больных описторхозом на 100 тысяч жителей (данные обращаемости в органы здравоохранения в 2004 г.) [1]. В действительности показатели значительно выше, так как большинство зараженных людей не имеют четко выраженных клинических проявлений болезни и поэтому к врачам не обращаются. Существующая параклиническая диагностика описторхоза основана на копроовоскопии и дуоденальном зондирование, однако копроовоскопия технологически сложно выполнима и требует высочайшей квалификации лаборанта-исследователя, тогда как дуоденальное зондирование ограничено физиологическими возможностями пациентов [2]. В связи с этим, актуальной остается проблема постановки или/и подтверждения данного диагноза.
Цель данной работы – подбор наиболее удобного и точного метода выделения ДНК O.felineus из фекалий с последующим использованием ее в полимеразной цепной реакции для обнаружения O.felineus в исследуемых биологических пробах.
В ходе работы были проанализированы образцы кала 50 человек, мужчин и женщин в возрасте от 18 до 65 лет (средний возраст 41,5 лет), отобранных по следующим критериям:
- положительный результат по двум из трех параметров: копроовоскопия, дуоденальное зондирование, иммуноферментный анализ;
-   отсутствие иных гельминтных инфекций;
-   отсутствие урогенитальных инфекций;
-   проведение специфической антигельминтной терапии (бельтрицид).
Также для отрицательного контроля были взяты образцы кала 20 здоровых человек, мужчин и женщин в возрасте от 18 до 65 лет (средний возраст 41,5 лет), отобранных по следующим критериям:
- отсутствие в анамнезе описторхозной инфекции;
- отсутствие глистных и урогенетальных инфекций;
- отсутствие печеночных патологий.
Выделение ДНК O.felineus проводили двумя методами. Первый метод основывался на  выделении яиц описторхов из фекалий методом Фюллеборна с последующим воздействием на них различными растворами: I. 0,5 М NaOH [3], 10% SDS, II. 0,2 М NaOH, 1% SDS, III. Sol D. Второй метод основывался на непосредственном воздействии данных растворов на фекалии. В результате, в первом методе разрушение оболочек яиц, а, следовательно, высвобождение ДНК, происходило в 100% после обработки растворами I, III и в 95% после обработки раствором II. Во втором методе ДНК в полученных пробах определялось в 95% случаев после воздействия на  фекалии растворами I, III и в 90% случаев с раствором II. Выделение ДНК  проводили фенол-хлороформным методом. Наличие в пробе ДНК O.felineus определяли при помощи полимеразной цепной реакции.
Таким образом, надежным методом выделения ДНК O.felineus из фекалий больных описторхозом является первый метод с предварительным выделением яиц методом Фюллеборна и воздействием на них  растворами I. 0,5 М NaOH, 10% SDS или III. Sol D.
Однако, в связи с цикличностью созревания яиц описторхов и с возможностью спазмирования сфинктеров печеночных каналов, яйца могут не попадать в толстую кишку, поэтому для более достоверной диагностики описторхоза мы предлагаем второй метод выделения ДНК. Так же второй метод более удобен в практическом применении, что не маловажно для клинико-лабораторной диагностики.


Список литературы:
1.    О распространении инвазии Opisthorchis felineus (Rivolta, 1884)
и Metorchis bilis (Braun, 1890) у населения некоторых регионов
Западной Сибири / Ильинских Е. Н., Новицкий В. В., Ильинских Н. Н., Лепехин А. В. // Бюллетень сибирской медицины. – 2006. - № 4. – С. 18 – 23.
2.    Описторхоз. Теория и практика / Ред. В. П. Сергиев, С. А. Беэр. – М., 1999. – 105 c.
3.    Development of a PCR-based method for the detection of Opisthorchis viverrini in experimentally infected hamsters / S. Wongratanacheewin, W. Pumidonming, R. W. Sermswan et all // Parasitology. – 2001. – N122. – P. 175-180