Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 63-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2004 год)

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (формат .PDF, 4,2 мб)

Во всем мире отмечается тенденция к росту заболеваемости бронхиальной астмой (БА). В настоящее время распространенность БА в России (по данным стандартизованных международных исследований ISAAC - International Study of asthma and Allergy in Childhood) достигает в детской популяции от 5 до 10% [2]. В Томске этот показатель составляет 8,3% [1]. В настоящее время известно, что основные механизмы развития БА связаны с персистирующим эозинофильным воспалением респираторного тракта, которое обуславливает наличие таких симптомов как экспираторная одышка, приступообразный кашель, удушье. Накопление эозинофилов в очагах воспаления зависит от ряда факторов, таких как селективная адгезия и миграция, а также повышение жизнеспособности в ответ на воздействие факторов роста (ИЛ-3, ИЛ-5, ИЛ-6) [3] Использование базисной противовоспалительной терапии позволяет контролировать течение заболевания.

Внутриклеточные медиаторы, высвобождаемые эозинофилами при БА обладают гистотоксическим эффектом, вызывая повреждение тканей и воспаление дыхательных путей. Для ограничения этого повреждающего действия в нормальных условиях эозинофилы элиминируются путём апоптоза. Однако отмечено, что при бронхиальной астме эозинофилы гибнут преимущественно по некротическому пути, высвобождая медиаторы воспаления и провоспалительные цитокины [4]. В отличие от апоптоза, некроз не обеспечивает сохранение мембранной целостности клетки и последующий фагоцитоз погибших клеток. В связи с этим апоптотическая гибель эозинофилов рассматривается как важный механизм ограничения воспалительного процесса.

Нами было проведено исследование степени апоптоза эозинофилов периферической крови у пациентов с БА различной степени тяжести до проведения базисной терапии и после окончания курса лечения. Целью исследования было изучение апоптоза на фоне проводимой противовоспалительной терапии.

Критериями включения в исследовании были: возраст от 7 до 16 лет, амбулаторные и стационарные пациенты, имеющие подтвержденный диагноз БА любой степени тяжести (определение степени тяжести и верификация диагноза были проведены в соответствии с критериями, изложенными в GINA 2002); наличие типичных симптомов заболевания (на момент включения в исследование), отсутствие базисной противовоспалительной терапии не менее четырех последних недель до включения в исследование. Критериями исключения были: нежелание пациента или его родителей участвовать в исследовании, наличие у ребенка декомпенсированной патологии, психических заболеваний.

В исследование были включены 65 детей с БА различной степени тяжести: легкая бронхиальная астма (ЛБА)-20 человек, среднетяжелая бронхиальная астма (СТБА)-23 человека, тяжелая бронхиальная астма (ТБА)-22 человека. В качестве группы контроля использованы данные 30 здоровых детей.

Всем пациентам (с целью верификации диагноза) и детям группы контроля было проведено исследование функции внешнего дыхания (ФВД) на аппарате MasterScope производства фирмы Yaeger (Германия), исследование уровня бронхиальной гиперреактивности (БГР) в метахолиновом тесте с использованием APS pro-небулайзера Yaeger (Германия) по стандартной методике (мерой гиперреактивности служил показатель РС20).

У всех пациентов проведено исследование апоптоза эозинофилов морфологическим методом (определение числа клеток с признаками апоптоза). Материалом для микроскопии служила периферическая кровь человека. Полученную кровь, смешанную с ЭДТА в соотношении 4:1, инкубировали 45-60 минут при 37°С. Образовавшийся над эритроцитами слой плазмы, собирали при помощи пастеровской пипетки и переносили в стерильную пробирку. Затем центрифугировали в течение 10 минут при 1000 об/мин Надосадочную жидкость удаляли, а осадок использовали для дальнейшего исследования (по методу Меньшикова В.В., 1997).

Оценка жизнеспособности клеток проводилась с помощью люминесцентной микроскопии. Исследуемый клеточный материал после промывки холодным раствором Хенкса инкубировали при 37°С в темном месте 10-20 мин с раствором, содержащим 1:10000 водного раствора акридинового оранжевого и 1:10000 раствора конго красного. Микроскопировали в камере Горяева (микроскоп МЛ-2Б) с увеличением объектив 40 хокуляр 10. Подсчитывали число жизнеспособных (со слабо флюоресцирующим ядром) и мертвых (ярко флюоресцирующее ядро) элементов на 100 клеток. Исследование данных показателей проводилось до назначения терапии и после окончания лечения в исследуемой группе и однократно у детей в группе контроля.

Пациентам с БА была назначена терапия фликсотидом (флутиказона пропионат -ФП) сроком на 3 месяца (100 мкг/сутки, 250 мкг/сутки, 500 мкг/сутки соответственно степени тяжести заболевания).

При анализе полученных результатов выявлено, что у детей в группе контроля степень апоптоза составила 45,29%. У пациентов с ЛБА, на момент включения, этот показатель составил 23,91%, после лечения ФП степень апоптоза увеличилась до 42,62%. В группе детей с диагнозом СТБА исходно степень апоптотической гибели составила 21,88%, при исследовании этого же показателя через 3 месяца проводимой терапии отмечено увеличение степени апоптоза эозинофилов периферической крови до 41,52%. У пациентов с ТБА на фоне проводимой терапии также отмечено увеличение апоптотической гибели эозинофилов, но в меньшей степени по сравнению с детьми, имеющими ЛБА и СТБА (с 22,73% до 33,33%).

В заключение следует отметить, что на фоне проводимой противовоспалительной терапии количество наблюдаемых эозинофилов с признаками апоптотической морфологии у пациентов, особенно в группе больных ЛБА и СТБА, не отличались от значений в контрольной группе. У детей с ТБА активность апоптотической гибели эозинофилов оставалась на низком уровне как в сравнении с ЛБА и СТБА, так и с показателями в группе контроля, что свидетельствует о нарушении механизмов программируемой клеточной гибели эозинофилов при тяжелой БА.

Список литературы:

1. Деев И.А. Эпидемиология аллергических болезней у детей города Томска / И.А. Деев, В.Ю. Тихонов // Вестник СГМУ. - 2000. - № 2.

2. Национальная программа «Бронхиальная астма у детей. Стратегия лечения и профилактика» М.: Артинфо Паблишинг. - 1997. - 93 с.

3. Cohen J.J. Immunological aspects of allergic asthma // Annu. Rev. Immunol. - 1994. - N. 12. - P. 295-335.

4. Dewson G., Wardlaw A.J., Walsh G.M. Human eosinophils: apoptosis versus survival in the mediation of inflammation // Apoptosis. - 1996. - № 1. - P. 111-118.