Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 65-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2006 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

 Актуальность проблемы. Туберкулез легких (ТЛ) продолжает оставаться одной из наиболее распространенных инфекций в мире и представляет огромную опасность для здоровья населения.  

Важную роль в борьбе с болезнетворными бактериями играют, как известно, мононуклеарные клетки крови. Несостоятельность иммунокомпетентных клеток во многом определяется структурно-функциональными нарушениями цитоплазматических мембран и в конечном итоге ведет к снижению противоинфекционной устойчивости макроорганизма.

Известно, что липидный бислой с ассиметрично встроенными белками составляет основу структурной организации клеточных мембран и его перестройки зачастую влияют на функциональную способность иммунокомпетентных клеток в целом. Немаловажную роль в развитии нарушений мембранных структур играют процессы свободнорадикального окисления липидов, привлекающих в настоящее время внимание все большего числа исследователей. Образование свободных радикалов – важный защитный механизм, лежащий в основе, прежде всего, неспецифической резистентности. Однако чрезмерная активация свободнорадикальных реакций может служить фактором повреждения мембран и ферментов клеток.

Вместе с тем сведения, касающиеся механизмов формирования окислительных нарушений и структурных изменений плазматической мембраны в иммунокомпетентных клетках крови при туберкулезе легких, являются немногочисленными и фрагментарными.

Целью настоящего исследования явилось изучение активности процессов перекисного окисления липидов и липидного состава мембран мононуклеаров крови при туберкулезном процессе.

Материал и методы исследования. В ходе работы было обследовано 9 первичных больных (мужчин и женщин) в возрасте 20–55 лет, страдающих лекарственно-устойчивым диссеминированным ТЛ. Диагноз ТЛ устанавливали на основании данных микроскопии мокроты и рентгенологического исследования легких (общепринятые методы). Для определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза использовали общепринятый метод абсолютных концентраций. Контрольную группу составили 9 здоровых доноров в возрасте 22-55 лет. Материалом исследования служили мононуклеарные лейкоциты периферической крови, взятой утром натощак из локтевой вены. Выделение лимфоцитов и моноцитов из крови осуществляли на градиентах плотности фиколл-урографина 1,077   и 1,083 г/см³  соответственно.

Содержание малонового диальдегида (МДА) определяли методом, основанным на способности МДА при высокой температуре и кислом рН взаимодействовать с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) с образованием окрашенного комплекса, имеющего максимум поглощения при длине волны 532 нм. Результаты выражали в мкмоль/мг белка.

Концентрацию диеновых конъюгатов (ДК) определяли путем добавления к 0,2 мл лизата мононуклеарных лейкоцитов 4 мл смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1, встряхиванием в течение 15 мин и добавлением 0,5 мл раствора HCl (рН=2,5), чем вызывали расслоение фаз. Спектрофотометрировали верхнюю (гептановую) фазу при длине волны 233 нм против гептана. Результаты выражали в мкмоль/мг белка.

       Изучение липидного спектра мембран лейкоцитов и моноцитов крови определяли методом тонкослойной хроматографии. Результаты выражали в ммоль фосфора/мг белка. Содержание белка в мембранах клеток определяли микробиуретовым методом. Концентрацию неорганического фосфора находили методом Бодански.

       Статистический анализ данных осуществляли с помощью критериев Стьюдента и Манна–Уитни с использованием программы Statistica for Windows Version 6.0.

Результаты исследования. В ходе изучения активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) было выявлено, что у больных лекарственно-устойчивым диссеминированным ТЛ на начальном этапе исследования (до начала терапии) содержание малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в лимфоцитах и моноцитах крови не претерпевало существенных изменений по сравнению с нормой (табл.).

 Данный факт, по-видимому, объясняется способностью микобактерий туберкулеза ингибировать окислительные процессы в мононуклеарных клетках, что является своего рода способом защиты возбудителя от действия факторов иммунной системы [1]. При этом липидный спектр мембран иммуноцитов характеризовался повышением содержания холестерина, что, вероятно, объясняется способностью микобактерий туберкулеза накапливать и использовать холестерин для защиты не только от действия лизосомальных ферментов, но и от активных продуктов ПОЛ [2, 4].

Таким образом, у больных туберкулезом легких до начала лечения отмечается повышение содержания свободного холестерина в мембранах мононуклеарных клетках. Однако активность процессов ПОЛ не отличается от контрольных значений [3, 5].

Таблица

Активность перекисного окисления липидов и содержание холестерина в мембранах мононуклеарных клеток крови у здоровых доноров и больных лекарственно-устойчивым

диссеминированным туберкулезом легких,  ± m

Примечание: р₁ – уровень статистической значимости различий по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров.

Список литературы:

1.      Владимиров, Ю. А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю. А. Владимиров, А. К. Арчаков. – М. : Наука, 1972. – 226 с.

2.      Еремеев, В. В. Взаимодействие макрофаг-микобактерия в поцессе реакции микроорганизма на туберкулезную инфекцию / В. В. Еремеев, К. Б. Майоров // Проблемы туберкулеза. – 2002. – № 3. – С. 54–57.

3.      Маянский, А. Н. Туберкулез (микробиологические и иммунопатогенетические аспекты) / А. Н. Маянский // Иммунология. – 2001. – № 2. – С. 53–63.

4.      Мишин,  В. Ю. Эффективность лечения туберкулеза легких, вызванного микобакте-риями с множественной лекарственной устойчивостью / В. Ю. Мишин, В. И. Чуканов, И. А. Васильева // Проблемы туберкулеза и болезей легких. – 2002. – № 12. – С. 18–27.

5.      Catfield, J. Essential role for cholesterol in entery of mycobacteria  info macrophages / J. Catfield, I. Pieters.  // Science. – 2002. – N. 5471 – P. 1647–1650.