Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра акушерства и гинекологии

 

Последних два десятилетия, в биологии и медицине ознаменовались повышенным интересом к изучению гемопоэтических стволовых клеток организма человека, в основном для лечения некоторых фатальных заболеваний, таких, как солидные опухоли, острые и хронические лейкозы, апластическая анемия, наследственные нарушения метаболизма и иммунной системы, сахарный диабет, патология миокарда и т.д. Источником стволовых клеток могут быть: костный мозг, стимулированные периферические гемопоэтические клетки, жировая ткань, эпителиальные клетки слизистой оболочки носоглотки в области обонятельного анализатора, пуповинная кровь. Получение стволовых клеток из первых четырех источников затруднительно из-за оперативного вмешательства и необходимости анестезии. При этом забор пуповинной крови лишен этих недостатков, и полностью является безопасным, как для матери, так и для новорожденного. Абсолютное количество гемопоэтических стволовых клеток, с иммунофенотипом CD34+, полученные из пуповинной крови в 10 раз превосходит их содержание  в костном мозге здорового человека, более того  эти клетки обладают повышенной пролиферативной способностью, и уникальными иммунологическими особенностями. Большинство этих клеток имеют незрелый фенотип характеризующий их низкую иммуногенность. На сегодняшний день успешность применения стволовых клеток во многом зависит, от достаточного количества CD34+ в пуповинной крови определяя тем самым трансплантационную способность.
Цель исследования: выявить факторы, оказывающие влияние на количество CD34+ в пуповинной крови.
Задачи исследования: выявить зависимость уровня CD34+ в пуповинной крови от  соматического анамнеза, течения беременности и родов, а также метода родоразрешения беременных женщин.
Материал и методы: на базе кафедры акушерства и гинекологии СибГМУ совместно с НИИ Стволовых клеток человека (г. Москва)  проведен ретроспективный анализ истории беременности и родов 18 женщин города Томска, пожелавшие сохранить стволовые клетки новорожденного, полученные из пуповинной крови.
Возраст женщин находился в пределах от 21 до 37 лет. Анализ соматического здоровья показал, что у 4 женщин имел место хронический холангиохолецистит в стадии ремиссии (22%), у  3 женщин – варикозная болезнь, ХВН-0 (16,6%), и у одной женщины – хронический пиелонефрит в стадии ремиссии ХПН-0 (5,5%). При анализе течения беременности выяснено, что  у 11 (61%) женщин в первом триместре был диагностирован ранний токсикоз легкой степени тяжести. Ни в одном случаи специализированного лечения не потребовалось. У 8 (44%) женщин была диагностирована плацентарная недостаточность. По средствам доплерометрического исследования сосудов пуповины и плаценты было выявлено, что  у 4 (50%) женщин имела место компенсированная плацентарная недостаточность, без нарушения маточно-плацентаного кровотока, а у 4 (50%) была диагностирована декомпенсированная плацентарная недостаточность, с нарушением маточно-плацентарного кровотока в 2 случаях –Ia и в 1-м II. Все беременные женщины были родоразрешены в срок. У 15 женщин (83,3%), роды проходили через естественные родовые пути, у 3 женщин (16,7%) роды закончились оперативным путем методом кесарева сечения, показания при этом были: клинический узкий таз, дискоординация родовой деятельности, неподдающиеся медикаментозной коррекции. У всех женщин родились живые дети с оценкой по шкале Апгар от 7 до 9 баллов. Средняя масса новорожденных составила 2980 гр. Послеродовый период у всех женщин протекал удовлетворительно, все женщины выписаны домой с ребенком.
Для забора (эксфузии) пуповинной крови применялся закрытая трансфузионная система, содержащая антиокоагулянт (цинтрат-фосфат-декстрозу-аденин [CPDA-1 Baxter Transfer Bag, S.A. de C.V., Mexico]). Эксфузия пуповинной крови осуществлялась при естественных родах в родильном зале, а при кесарево сечения – в операционной. Во время родов после рождения (извлечения) ребенка и отделения его от последа, пуповинный канатик на протяжении 15 см обрабатывался раствором антисептика. После чего производилась пункция вены иглой соединенной  с системой (контейнером) для забора пуповинной крови. Контейнер располагался ниже уровня женщины на 50 см, куда кровь самопроизвольно стекала. Вся процедура забора занимала 5 минут. После обескровливания плаценты соединительную трубку от контейнера перекрывали. После забора пуповинная кровь из родильного дома доставлялась  воздушным транспортом, в специальном термоконтейнере (сумке-холодильнике) в лабораторию НИИ Стволовых Клеток Человека г. Москва. Термоконтейнер поддерживал температуру от +8 до +22 гр., время транспортировки составляло от 8 до 28 часов. После доставки пуповинной крови в лабораторию, производилось выделение и типирование гемопоэтических стволовых клеток CD34+ с помощью проточной цитометрии. Среднее количество  CD34+, полученных из пуповинной крови, составило 685х106/л.
Статистическая обработка полученных данных производилась при помощи пакета программного обеспечения Statistic 6.0.  Корреляционный анализ проводился при помощи непараметрического метода Спирмена.  Корреляция считалась сильной, если коэффициент корреляции  был больше, либо равно 0,75 (r?0,75)., и умеренной если  0,25?r?0,75
Результаты: При проведении корреляционного анализа было замечено, что уровень CD34+  тем меньше, чем выше стадия плацентарной недостаточности, при этом индекс корреляции r=0,5  (p<0,05). Также отмечена корреляционная зависимость от типа родоразрешения, у женщин которых роды протекали через естественные родовые пути  уровень CD34+ в пуповинной крови достоверно выше (p<0,05), по сравнению с женщинами которые были родоразрешены оперативным путем, индекс корреляции составил  r=0,45. По остальным признакам корреляционной зависимости не наблюдалось.
Выводы: таким образом, в ходе проведенного нами анализа удалось выявить, что на уровень CD34+ пуповинной крови оказывает влияние наличие плацентарной недостаточности, чем выше стадия плацентарной недостаточности тем ниже уровень CD34+, а также метод родоразрешения пациентки, у женщин которых роды закончились через естественные родовые пути  уровень CD34+ выше чем у женщин после Кесарева сечения.

Список литературы:
1.    Гришина, В. В. разработка оптимальных методов криоконсервирования кроветворных клеток пуповинной крови человека для трансплантации / В. В. Гришина // Клеточная транспланталогия  тканевая инженерия. - 2006. №1. – с 52-59