Лаборатория стволовых клеток института экспериментальной кардиологии

 РКНПК Минздравсоцразвития, Москва, Россия

 

Эта статья опубликована в сборнике научных статей с материалами XI Телеконференции с международным участием "Актуальные проблемы современной науки", Томск, 27-31 мая, 2013 год 

  

В работе использовали контузионную модель спинномозговой травмы. У половозрелых крыс линии Доули-Спрег обоего пола, под нембуталовым или кетаминовым наркозом проводили ламинэктомию дуги позвонка с остистым отростком в пределах одного спиномозгового сегмента. Грузик весом 10 г, роняли на твердую мозговую оболочку сегмента спинного мозга (СМ) уровня Th10-L1 с высоты 25 мм как описано в работе (Basso, et al., 1995). После такого контузионного повреждения СМ у крыс полностью отсутствовали движения задних конечностей. Также вследствие этого воздействия у животных была кровь в моче и трудности с выделением мочи. При этом часть животных погибала. У выживших крыс движения не восстанавливались даже после четырехнедельного ухода за ними. Материал от экспериментальных животных фиксировали в растворе параформальдегида на 0,1 М фосфатном буфере и дофиксировали в 1% четырехокиси осмия. Проводили материал по спиртам возрастающей концентрации и заключали с эпоксидную смолу аралдит. Поврежденные сегменты СМ располагали в заливочной капсуле, как вдоль ее длинной оси, так и поперек нее. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим. На микронных срезах оценивали состояние серого и белого вещества СМ. Сразу же после операции на срезах СМ обнаруживали кровоизлияния. На вторые сутки после воздействия наблюдали повреждения мотонейронов передних рогов СМ. Показали, что на неосмированных препаратах серое и белое вещество СМ различалось хорошо, но в белом веществе миелиновые нервные волокна выглядели сильно отечными по сравнению с миелиновыми волокнами корешков СМ. На осмированных препаратах этих изменений ни в сером веществе, ни в белом веществе не обнаруживали: миелиновая оболочка проводящих путей СМ и его корешков выглядела сохранной. Это дает основание надеяться на успешность последующего ультраструктурного исследования материала. Изменения в степени сохранности нейронов и глии серого вещества СМ при разных методах фиксации материала были менее выраженными по сравнению с обнаруженными в белом веществе СМ. Мочевой пузырь у экспериментальных животных был  перерастянут и у части крыс содержал камни. Почки были сильно увеличены в размерах и выявляли мозаичные изменения в структуре коркового и мозгового вещества. Двигательную активность крыс оценивали количественно с использованием суживающейся беговой дорожки, прибора рота-род с крутящимся барабаном и теста ВВВ (Hamm, et al., 1994). Оказалось, что первые два метода не работали для животных с контузионной моделью повреждения СМ (крысы не могли передвигаться самостоятельно, так как не держали вес своего тела). Об исходном состоянии двигательных функций задних конечностей у крыс и об их восстановлении в ходе эксперимента можно было судить лишь по ВВВ тесту. Сравнивали функциональные данные с результатами морфологических исследований СМ при травме. Результаты работы показали, что двойная фиксация лучше сохраняет структуру СМ при его повреждении у крыс в эксперименте и позволит проводить  светооптическое и ультраструктурное изучение такой модели спиномозговой травмы.